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分子实验报告 分子生物学Ⅱ综合性实验论文 BEL7402细胞MDR1基因单核苷酸多态及 GAPDH蛋白表达检测 姓名： 班级：生物制药10 学号： 指导教师：生物科学系分子生物学 综合性实验教学小组李黄金 广东药学院 生命科学与生物制药学院 目 录 1、前言 2、中文摘要/Abstract 3、材料与方法 3.1 真核生物基因组DNA的提取及含量纯度检测 - 9 - 3.1.1 真核生物基因组DNA的提取 - 9 - 3.1.2 基因组DNA的鉴定-琼脂糖凝胶电泳法 - 13 - 3.1.3 基因组DNA纯度的鉴定-紫外分光光度计法 - 11 - 3.1.4 目标基因扩增 - 15 - 3.2 目标基因单核苷酸多态（SNP）的检测 - 16 - 3. 3 GAPDH基因免疫印迹 - 19 - 3.3.1 样品蛋白质的制备、 蛋白质含量测定 - 20 - 3.3.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 - 24 - 3.3.3 凝胶转膜及其检测 - 28 - 4、结果与讨论 4. 1 真核生物基因组DNA的提取及含量纯度检测 - 9 - 4.2 目标基因单核苷酸多态（SNP）的检测 - 16 - 4. 3 GAPDH基因免疫印迹 - 19 - 5、参考文献 6、致谢 前言 中文摘要：本综合性实验前部分是先从Bel7402细胞中提取目标基因多药耐药基因1(MDR1)，然后取部分提取样品进行琼脂糖凝胶电泳，目的是检测目的基因的分子量大小，再用紫外分光光度计检测样品NDA的浓度和纯度，之后用PCR技术扩增目的基因。再对扩增的目的基因进行单核甘酸多态性（SNP）检测，主要技术是限制性酶切片段长度多态性（RFLP），SNP用于疾病基因的定位|克隆和鉴定。后部分是从Bel7402细胞中提取细胞总蛋白，然后制作蛋白质标准曲线，测定总蛋白含量。再对蛋白质SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳之后将蛋白条带转移到PVDF膜，一抗、二抗孵育后用DAB显色，目的是检测目的基因GAPDH的表达。 Abstract：This comprehensive experiment prior to the first part is from Bel7402 cell extract target gene many drug resistance gene 1 (MDR1), then take part extraction samples agarose gel electrophoresis, the purpose is to test the purpose gene molecular weight size, garnish with ultraviolet spectrophotometer testing sample NDA concentration and purity, and then use PCR amplification purpose gene technology. For the purpose of the amplification and the gene mononuclear nucleotide polymorphisms (SNPS) test, the main technology is restriction enzyme fragment length polymorphism (RFLP), SNP for disease gene location | cloning and identification. From the back part of the Bel7402 cells, cell total protein, and then make protein standard curve, determination of total protein content. Again to protein SDS polyacrylamide gel electrophoresis after protein banding transferred to PVDF membrane, a resistance, two resistance after incubation with DAB color, the purpose is to test