shRNAs对胃癌细胞系BGC-823胃泌素表达的抑制效应.docVIP

shRNAs对胃癌细胞系BGC-823胃泌素表达的抑制效应 第38卷第2期 2007年4月 解剖 ACTAANAT0MlCASlNlCA Vo1.38.No.2 ADr.20o7 shRNAs对胃癌细胞系BGC.823胃泌素 表达的抑制效应 丁一李军扩邢文英乐晓萍张钦宪 (郑州大学医学院组织学胚胎学教研室,河南省分子医学重点实验室,郑州450052) [摘要】目的研究shRNAs对胃癌细胞系BGC一823胃泌素表达的抑制效应.方法设计4条针对胃泌素基 因不同位点的寡核苷酸序列,通过体外转录法合成相应的shRNAs.以lOnmol/L,20nmol/L,40nmol/L和80nmol/L的 终浓度,将4条shRNAs分别转染胃癌细胞BGC一823.应用原位杂交及免疫细胞化学方法检测胃泌素表达的抑制效 果,筛选最有效的shRNA.应用RT-PCR进一步验证其对胃泌素mRNA的抑制效应.应用MTI法检测4条shRNAs 在不同浓度下对BGC一823细胞的增殖抑制效应.结果转染后24h,48h及72h,胃泌素表达均被明显地抑制,并呈 现浓度及时间依赖的趋势.shRNA3转染后72h,mRNA及蛋白水平表现出最佳的抑制效率,分别为(54.27± 0.042)%和(41.69±0.038)%.RT-PCR结果显示,shRNA3对BGC一823细胞胃泌素mRNA的抑制率为48.1%.mT 结果显示,除shRNA4处理组外,其余3组处理细胞均表现出浓度依赖性的增殖抑制趋势.结论4条shRNAs在 mRNA及蛋白水平均明显地抑制了胃癌细胞BGC一823胃泌素的表达,shRNA3可能为最有效的胃泌素一shRNA. shRNA对胃泌素表达的抑制,显着降低了BGC.823细胞增殖能力. [关键词]胃泌素;shRNA;胃癌;原位杂交;逆转录一聚合酶链反应 [中图分类号】R735.2[文献标识码】A[文章编号]0529—1356(2007)02—182 舳ITIoNEFFECTSoFVARIoUSGASTRD.shRNAsONGASTRD EXPRESSIONINGASTRICCANCERCELLLINEBGC.823 DINGYi,LIJun-kuo,XINGWen-ying,LEXiao—ping,ZHANGQin-xian (DepartmentofHistologyandEmbryology,MedicalCollege,ZhengzhouUniversltr; HenanKeyLaboratoryofMolecularMedicalScience,Zhengzhou450052,China) lAbstract]ObjectiveTostudytheinhibitioneffectsofvariousgastrin-shNAsongastrinexpressioningastriccancercell lineBGC一823.MethodsFournucleotidesequencesofshRNAweredesignedcorrespondingtovarioussitesofgastringene.Four shRNAsweresynthesizedbyinvitrotranscriptionandtransfectedintogastriccancercelllineBGC一823atthefinalconcentrationof 10nmol/L,20nmol/L,4Onmol/Land80nmol/Lrespectively./nsituhybridizationandimmunohistochemistrytechniqueswereapplied toinvestigatetheinhibitionofgastrinexpressionandscreenthemosteffectiveshRNA.TheinhibitoryeffectongastrinmRNAof screenedshRNAwasfurtheridentifiedbyRT-PCR.MTIassaywasusedtodeterminetheinhibitoryeffectof4shRNAsatvarious finalconcentrationsonthegrowthofBGC一823cells.ResultsThegastrinmRNAandproteinexressionweresuppresseddistinctly 24,48,and72houmaftertransfection,andexhibitedtime—andconcentration—dependenttendency.Thehighestsuppression emciencyonbothmR