猪伪狂犬病病毒GZ-Z1株gE基因原核表达质粒的构建.docVIP

猪伪狂犬病病毒GZ-Z1株gE基因原核表达质粒的构建 贵州农业科学2011,39(11):149～152 GuizhouAgriculturalSciences [文章编号31001—3601(2011)11-0699—0149—04 猪伪狂犬病病毒GZ—Z1株gE基因原核表达质粒的构建 曾智勇,周莉,汤德元,刘志杰,梁海英., 李谦,肖超能,王彬,王凤,甘振磊 (1.贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;2.贵州省动物疫病研究室,贵州贵阳550025; 3.贵州大学教学实验场,贵州贵阳550025) [摘要]为给猪伪狂犬病病毒的诊断及防治提供科学依据,参考GenBank中猪伪狂犬病病毒(PRV) gE基因序列,设计1对特异性引物,以PRVGZ—Z1株DNA为模板,进行gE基因的PCR扩增,扩增产物与 pMD18一T载体连接,鉴定正确后,再亚克隆至pET32a(+)原核表达载体中,经鉴定后测序.结果表明:目的 片段为PRVgE基因完整开放阅读框,大小1734bp,编码577个氨基酸,在pET32a(+)载体中位置正确,表 明,pET32a—gE原核表达质粒构建成功.该基因与国内外其他l8株PRV的gE基因推导氨基酸序列同源 性为94.8%～98.6%;与国外分离株属同一个进化分支,遗传关系相对较近;而与国内Fa,Min,GDSH等毒 株亲缘关系较远. [关键词]伪狂犬病病毒;gE基因;克隆;原核表达质粒 [中图分类号]$852.651[文献标识码]A ConstructionofProkaryoticExpressionPlasmidofgEGeneofPRVGZ—Z1Strain ZENGZhi—yong,ZHOULi,TANGDe—yuan,LIUZhi-jie,LIANGHai—ying.,LIQian, XIAOChao—neng,WANGBin,WANGFeng,GANZhen—lei (1.CollegeofAnimalScience,GuizhouUniversity,Guiyang, Guiyang,Guizhou550025;3.TeachingExperimentFarm, Guizhou550025;2.GuizhouAnimalDiseaseLaboratory, GuizhouUniversity,Guiyang,Guizhou550025,China) Abstract:ThegEgenewasamplifiedbyPCRtechnologytakingDNAofPRVGZ-Z1strainasthe templatebasedonapairsofspecificprimers.ThentheamplifiedproductwasIinkedwithpMD18一T vector.Finally,theidentifiedamplifiedproductwasclonedintothepET32a(+)prokaryoticexpression vector.ThesequencingresultsshowedthatthegEgenewithanintactopenreadingframe,1734bpand 577aminoacidswasinthepET32a(+)vectorcorrectly,whichindicatedthatthepET32a—gEprokaryotic expressionplasmidwasstructuredsuccessfully.ThehomologyofaminoacidsequencebetweengEgene andotherl8PRVstrainsfromhomeandabroadwas94.8%～98.6andthegEgeneofPRVGZ—Z1strain andforeignisolatedstrainsbelongedtothesameevolutionbranch.TherelationshipbetweenthegEgene ofPRVGZ—Z1strainanddomesticFa,MinandGDSHstrainswasveryfar. Keywords:pseudorabiesvirus;gEgene;cloning;prokaryoticexpressionplasmid 猪伪狂犬病(porcinepseudorabies,PR)是由伪 狂犬病病毒(猪疱疹病毒I型,PRV)引起的一种危 害严重的急性传染病,主要以新生仔猪的急性死亡 以及4周龄以上仔猪出现神经症状,妊娠母猪以繁 殖障碍,流产,死胎及呼吸道症状为特征I1].具有传 播快,死亡率高,流行广泛,传播途径多,病原体顽固 等特点,对世界畜牧业产生了极大的危害,其危害程 度