乳酸细菌VP试验吲哚试验甲基红试验.PDFVIP

实验八、微生物生理生化测定、乳酸发酵 基本概念： 抗菌谱：每种抗生素特有的抗菌范围，能杀灭或抑制的细 菌种类，医学上称为抗菌谱。 乳酸细菌 V. P. 实验 吲哚实验 甲基红实验 [实验目的] 1. 学习细菌鉴定中常用的生理生化反应及 原理 2. 了解微生物与氧的关系 3. 学习抗菌谱的测定方法 4. 学习酸奶制作方法 5. 学会测微尺的使用和计算方法 [实验材料] 1. 培养基：上次课准备的各种培养基 2. 试剂、抗生素等 3. 菌种： 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌 产气肠杆菌 变形杆菌 枯草杆菌 丙酮丁醇梭菌 实验原理 1. V. P. 实验（Voges-Proskauer实验） （葡萄糖蛋白胨水培养基） 微生物发酵葡萄糖产生丙酮酸，2分子丙 酮酸脱羧形成乙酰乳酸，继续脱羧形成乙酰 甲基甲醇，后者在碱性条件下与胍类、肌酸 类物质反应，形成红色化合物。 2. 甲基红（Methyl Red, M.R.）实验 （葡萄糖蛋白胨水培养基） 有些细菌发酵糖类产生乳酸，琥珀酸、醋 酸和甲酸等大量酸性产物，使发酵液的pH下 降到4.2 以下，当加入甲基红试剂后，使发酵 液变红色。 有些细菌发酵糖类产生一些有机醇类中性 化合物，有机酸较少，发酵液pH较高，当加 入甲基红试剂后，发酵液不变红色。 甲基红反应 3.吲哚实验（蛋白胨水培养基） 有些细菌如大肠杆菌、霍乱弧菌等含有 色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚 （靛基质），当吲哚遇到含有对二甲基氨基苯 甲醛试剂，形成红色的玫瑰红吲哚。 4. 微生物与氧的关系 （酚红半固体培养基） 大肠杆菌：在整个培养基中都生长，产生大 量气泡—兼性厌氧 枯草杆菌：只在培养基表面生长—好氧 丙酮丁醇梭菌：在培养基的底部生长，产生 大量气体，把培养基顶起— 厌氧 5. 糖发酵实验 (葡萄糖、蔗糖、乳糖培养基各四支) 可根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产 酸产气作为鉴定菌种的依据。是否产酸，可在糖发 酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即B.C.P指示剂， 其pH在5.2 以下呈黄色，pH在6.8 以上呈紫色），经 培养后根据指示剂的颜色变化来判断。是否产气， 可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。 阳性反应：产酸产气，培养基变为黄色， 杜氏小管中不同程度充满气体。 阴性反应：产酸，不产气 不产酸，不产气 6. 抗生素抗菌谱及微生物抗药性 通过滤纸片周围出现的抑菌圈的大小， 判断某种细菌对某种抗生素的敏感性。 抗 抑 — 生 菌 素 圈 7. 乳酸发酵 （酸奶制作） 4ºC冰箱过液后，酸奶呈固态或半固态, 乳酸细菌发酵糖类产酸，使pH降低到4.6左 右（酪蛋白等电点），使酪蛋白在等电点发 生沉淀。同时，微生物的代谢活动使其营养 成分发生改变。 同学品尝自己制作的酸奶 [实验内容] 1. V. P. 实验和甲基红实验 无菌操作：分别向5支葡萄糖蛋白胨水培养基 中分别接入大肠