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⑵溶血离心沉淀法 提高检出率,操作简单,适用于基层医院 ⑶ 血沉棕黄层定量分析法(QBC) 原理:血中各成分或细胞比重不同,WBC轻于受染RBC轻于正常RBC,离心分层以使受染RBC密集,进而用荧光显微镜检查。 优点:敏感性比普通镜检法高7倍;可定量 缺点:易出现假阳性;费用高;对实验器材有特殊要求 ⑴循环抗体检测 抗疟原虫抗体在感染后2~3w出现,4~8w达高峰,后下降 主要用于流调、防治效果评估、献血员筛查等 临床仅作辅助诊断,无早期诊断价值 常用方法有IFA、IHA、ELISA ⑵循环抗原检测 是诊断现症患者或带虫者的重要方法 常用方法有RIA、ELISA 2.免疫学检测 核酸探针:用于P.f的检测,敏感性高 PCR:能确诊P.v、 P.f的现症患者 PCR-ELISA:可在疟疾诊断的同时进行种属鉴定,能诊断混合感染 3.分子生物学检测 五、流行与防治 1.分布 疟疾分布广泛,主要在亚热带和热带地区。全球每年有3~5亿人感染,疟疾曾是重点防治的五大寄生虫病之一。经过多年防治,我国疟疾疫情已大幅度下降。 (2)传播途径 经雌蚊叮人皮肤传播(主要传播途径) 经输血感染、 经胎盘感染 (3)易感人群 除高疟区成人和从母体获得一定抵抗力的婴儿外,一般人对疟原虫普遍易感。 2. 流行环节 (1)传染源 外周血液中有成熟配子体的现症病人和带虫者。 3.防治 防蚊灭蚊 常用预防药物有氯喹或乙胺嘧啶加磺胺多辛; 接种疟疾疫苗。 治疗药物:杀灭红内期原虫的药物有氯喹、磷酸氯喹、青蒿素等;杀灭红外期原虫和配子体的药物有伯氯喹、伯胺喹啉、乙胺嘧啶等。 * 对人体致病呈多样性,其危害严重,为第二大致残疾病,给患者带来极大的心理和生理痛苦。经过50余年的防治,虽然1994年全国已达到基本消灭丝虫病的标准,但截止到2006年,我国仍有近40万的慢性丝虫病人。 * 在蚊体内-只发育不增殖 ,动物实验表明两种丝虫除可经皮感染外,可能有经胎盘或口感染。感染期幼虫进入人体后的移行途径尚未完全清楚 * 目前国内常用的方法有敏感性和特异性均较高的丝虫成虫冰冻切片抗原间接荧光抗体试验(IFAT)、丝虫成虫冰冻切片免疫酶染试验(IEST) * 对人类危害极大,非洲每年死于疟疾的儿童约100万,在我国华南、华中的某些地区,特别是云南和海南省尚有不少病例 * * QBC原用于血液内各种成分的定量分析, 一、形态与生活史(P.v) 蚊子体内 人体内 肝C内期 RBC内期 1.在人体内的发育 重点 子孢子 (蚊口喙) 按蚊吸血 侵入肝C内 被吞噬C吞噬 速发型子孢子 迟发型子孢子(休眠) 无性裂殖 裂殖体 胀破肝C 释放 裂殖子 进入肝血窦 滋养体 ⑴肝细胞内期(红外期) Pv. 8d Pf. 6d 小滋养体(环状体) 大滋养体 早期裂殖体 成熟裂殖体 裂殖子 胀破RBC 释放 雌配子体 雄配子体 雌蚊吸血 进入蚊胃 裂殖子 (肝C释放) 侵入RBC 被吞噬C吞噬 ⑵ 红细胞内期 主要致病阶段 无性裂殖 无性裂殖 2.在按蚊体内的发育 雌配子体 雄配子体 雌蚊吸血 进入蚊胃 合子 有性生殖 动合子 穿过胃壁 子孢子 卵囊 逸出 (蚊唾液腺) 子孢子 主要鉴别依据 RBC内期 疟原虫各期形态特征 被寄生的红细胞的变化 疟原虫基本构造: 细胞膜、细胞质、细胞核 瑞氏或姬氏染色 核-紫红色,胞质-兰色,疟色素-棕黄色 【疟原虫的形态鉴别】 〖小滋养体--环状体〗 虫体:浅紫蓝色,胞质较少,中间为空泡 细胞核:深紫红色,位于虫体一侧 RBC:无明显变化 鉴别:恶性疟原虫(P.f)环状体 环纤细,约占RBC直径的1/5(P.v占RBC1/3) 每一个RBC常含2个以上原虫(P.v 1个) 虫体常位于RBC的边缘(P.v 比较靠中) 〖大滋养体〗 虫体:经8~10h,虫体增大,伸出伪足,胞质增多,出现疟色素。 红细胞:胀大,颜色变淡,并出现薛氏小点(淡红色的小点) 细胞质 核 疟色素 薛氏小点 晚期大滋养体 虫体渐大,充满RBC 胞质增大,伪足活动增加,形状不规则, 常形成一大空泡 胞核增大 疟色素增多 RBC胀大,变形,薛氏小点明显 鉴别:P.f 大滋养体 体小结实,圆形,无伪足活动 疟色素集中一团,黑褐色 多集中于内脏毛细血管中,不出现在外周血 〖裂殖体〗 早期裂殖体 未成熟裂殖体 成熟裂殖体 未成熟裂殖体 晚期滋养体经40h发育: 虫体变圆,空泡消失 细胞核分裂2个以上 细胞质未分裂 疟色素仍分散 受染RBC变大、颜色苍白、形态不规则 成熟裂殖体 虫体胞质分裂,包绕每个核,形成裂殖子 裂殖子12~24个,平均16个,排列不规则 疟色素集中成堆 红细
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