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生物传感器在鱼肉鲜度测定中的 应用和进展 摘 要 引 言 一、挥发性物质评价方法 1、酶电极生物传感器 2、气体传感器(电子鼻、电子舌) 二、ATP降解物指标评价方法 1、酶电极传感器 2、酶反应器系统 三、生物传感器测定鱼肉鲜度的特点及其发展趋势 摘 要 本文综述了近年生物传感器在鱼肉鲜度测定中的应用和进展。生物传感器主要应用在鱼肉鲜度测定中的挥发性物质评价法、APT降解物评价法中。本文并且阐述了生物传感器测定鱼肉鲜度的原理和发展趋势。 关键词: 鱼肉鲜度;生物传感器;三甲胺;三磷酸腺苷 引言 新鲜度是鱼肉质量的一个重要指标。由于鱼肉鲜度测定实际应用的需要,开发快速、廉价、测量精确的鲜度检测方法和仪器是目前的研究热点。将生物传感器用于鱼肉鲜度的测定可以显著提高分析效率,减少分析成本。 一、挥发性物质评价方法 生物传感器通过衡量一些特征指标(通常是胺),来指示鱼肉的新鲜度。对特征挥发物的测定可以用来指示鱼肉的鲜度和腐败情况。总挥发性碱基氮(TVB-N)是最广泛使用的测定鱼肉鲜度的指标。测定的总挥发性碱基物质主要来源于氨、三甲胺(TMA)和二甲胺(DMA)。 1、酶电极生物传感器 将胺氧化酶结合在过氧化氢电极上,构成测定胺的微型电极。电极对胺的响应时间很短, 一般为40 s左右。每天校正电极,酶电极可连续使用数周。应用该系统和液相色谱法测定贮藏中的鱼肉中的胺类物质, 通过比较两者的数据可以评价电极性能。电极需要有很好的重复性和稳定性。 Chrystelle Fillit等[1] 利用在电极上固定对三甲胺有高敏感和高选择的含黄素单氧化酶3(FMO3)的薄膜发展了电导酶生物传感器测定三甲胺的方法。 Laura Muresan等[2]通过高选择性电化学传感器和阳离子弱酸交换柱的联用实现了生物胺的在线检测。 Sondes Bourigua等[3] 开发了对三甲胺敏感的安培和阻抗生物传感器,它是建立在二茂铁掺杂聚吡咯的基础上的,含黄素单氧化酶3(FMO3)以共价键结合其上。 M. Asunción Alonso-Lomillo等[4]报道了建立在MAO酶/HRP酶和DAO酶/HRP酶基础上的生物传感器,酶以共价键结合到碳工作电极,以丝网印刷碳电极测定生物胺。 Beáta Bóka等[5]开发了三种检测鱼肉中的生物胺的安培酶生物传感器,从而实现污染监测。并且应用了一种特殊的离心分离器用于存放条件不同的鱼肉的样本提取,与高效液相色谱法和化学法检测进行了比较。这三种生物传感器可用于鱼肉腐败早期阶段的监测。 2、气体传感器(电子鼻、电子舌) 在食品中使用称为电子鼻的气体传感器阵列进行挥发性物质的快速测定已逐渐引起人们的兴趣。 在应用快速气体传感器技术测定鱼类鲜度时,需要制定基于气体传感器的标准方法,从而使它有效地用于检测作为鱼肉鲜度阶段指示物的特征挥发性物质。 J.K. Heising等[6]建立了顶空测定生物胺的方法,可以实现对市售鱼肉的无损分析。此电极可作为开发智能传感器的基础。 Luis Gil等[7]报道了采用一种厚膜电极阵列构建的电子舌,可以作为分析鱼肉鲜度的潜在应用方法。 Miyasaki等[8]报道了用电子鼻以及顶空固相微萃取结合气-质联用方法监测储存3-4天后鲜鱼肉挥发性化合物的变化。样品的主要成分用电子鼻分析 。 最近开发出的人工嗅觉系统[9],聚集许多非特异性的传感器,已经可以通过捕捉顶空成分中的成分差异区分新鲜和变质的产品。 电子鼻、电子舌等非生物电化学传感器利用其集成化、多参数测定的优势,并通过计算机训练,以及运用神经网络等数据校正方法,发展出智能化的鱼肉鲜度评价方法,形成对生物传感器测定鱼肉鲜度方法的有效竞争。但其装置复杂,造价高,技术要求高,所以生物传感器在现场、野外快速检测和便携化的方向发展可以发挥其独特的优势。同时其集成化和智能化也可以成为生物传感器在鱼肉鲜度测定中的发展方向的借鉴。 二、ATP降解物指标评价方法 鱼死后,鱼肉中ATP分解顺序如下: ATP→ADP→AMP→IMP→Ino→Hx→UA。 ATP为三磷酸腺苷,ADP为二磷酸腺苷,AMP为一磷酸腺苷,IMP为肌苷酸,Ino为肌苷,Hx为次黄嘌呤,UA为尿酸。 ATP在ATP酶作用下降解成ADP,ADP在磷酸激酶的
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