ACE抑制肽定量构效关系的研究 - 江苏省大学生创业教育网.docVIP

江苏省第一届大学生 科技创新创业成果（项目）交流会 参会申报材料 学校名称：扬 州 大 学 项目名称：ACE抑制肽定量构效关系的研究 领衔主持人：蔡丽丽 成果形式：科技创新成果 所属产业：现代农业 二○一二年十月 一、项目简介 ACE（血管紧张素转化酶）是人体血压调节的关键酶之一，对其活性的有效抑制可实现辅助降血压的功效。某些短肽类具有抑制ACE活性的作用，简称为ACE抑制肽，是目前血压调节功能食品和药物的研究热点。在寻找高活性、高得率ACE抑制肽的过程中，虽有大量文献针对天然蛋白原料、制备方法、制备条件等方面进行了研究，但鲜见针对ACE抑制肽在分子水平上的作用机理方面的报道。揭示定量构效关系上的规律，可以在分子水平上解释微观结构对各种宏观性质的影响，发现对ACE抑制活性起决定性作用的结构因素，有助于预测缺乏试验数据的多肽的活性和物理化学等性质。 构效关系研究中构效模型的验证起到了不可或缺的作用，建立起指导性强、适用范围广的构效模型对ACE的发展具有深远的意义。 运用主成分分析(principal component analysis, PCA)法，将经典的z-scales作为描述子，筛选了从不同天然物质中制备得到的150种ACE抑制三肽作为样本（已知其抑制活性），进行分析，通过偏最小二乘回归PLS）法建立三肽定量构效模型，并用已知抑制活性的三肽进行检验。 选取文献中已报道的鱼类蛋白、乳源蛋白、植物蛋白ACE抑制肽，以及微生物粗酶酶解得到的ACE抑制肽，根据其氨基酸组成，用人工合成法合成多肽，并用高效液相色谱法测定其体外ACE抑制的活性，然后代入模型进行分析，优化构效模型。 二、发表论文 三、专利认证要求书 （专利受理号：201110121600.X） 权利要求书 1、精确测定血管紧张素转化酶体外抑制活性的方法，其特征在于在相同的色谱条件下分析，分别测定抑制剂不存在的条件下血管紧张素转化酶与马尿酰组胺酰亮氨酸反应的混合物中马尿酸的峰面积A、抑制剂存在的条件下血管紧张素转化酶与马尿酰组胺酰亮氨酸反应的混合物中马尿酸的峰面积B和抑制剂存在、且不添加血管紧张素转化酶的条件下在马尿酸出峰位置相关肽的峰面积C；然后按（A-（B-C））/A ×100%公式计算，取得血管紧张素转化酶体外抑制活性的抑制率。 2、根据权利要求1所述精确测定血管紧张素转化酶体外抑制活性的方法，其特征在于所述测定马尿酸的峰面积A时的反应混合物的配置方法是： 取10-50μL的血管紧张素转化酶溶液和50-200μL HEPES缓冲液混合置于37℃下水浴5min，然后于同一温度下加入80μL的马尿酰组胺酰亮氨酸溶液水浴反应30min，最后在混合体系中加入200-800μL HCl终止反应，样品经0.22μm的针式滤器过滤后进样。 3、根据权利要求1所述精确测定血管紧张素转化酶体外抑制活性的方法，其特征在于所述测定抑制剂马尿酸的峰面积B时的反应混合物的配置方法是： 取10-50μL的血管紧张素转化酶溶液和50-200μL抑制物样品混合置于37℃下水浴5min，然后于同一温度下加入80μL的马尿酰组胺酰亮氨酸溶液水浴反应30min，最后在混合体系中加入200-800μL HCl终止反应，样品经0.22μm的针式滤器过滤后进样。 4、根据权利要求1所述精确测定血管紧张素转化酶体外抑制活性的方法，其特征在于所述测定相关肽的峰面积C的反应混合物的配置方法是： 取90-130μL的HEPES缓冲液和50-200μL抑制物样品混合置于37℃下水浴35min，然后在混合体系中加入200-800μL HCl，样品经0.22μm的针式滤器过滤后进样。 说明书 精确测定血管紧张素转化酶体外抑制活性的方法 技术领域 本发明属于功能食品的检测方法领域。 背景技术 血管紧张素转化酶是人体血压调节的关键酶，抑制其活性是实现血压调节的手段之一。以血管紧张素转化酶体外抑制活性为评价指标，寻找、筛选具有血管紧张素转化酶抑制活性的产物（如：生物活性肽）是开发调节血压的药物和功能食品的基础工作。已有方法中紫外可见分光光度法中的乙酸乙酯的残留、底物（肽类）的干扰，通常会导致分析结果偏低；二元梯度洗脱高效液相色谱法，未考虑底物对测定结果的影响，也会导致分析结果偏低；高效液相色谱和质谱联用法设备投资大，维护和分析成本高，不便普及使用。 发明内容 本发明目的在于提出一种准确、方便测定血管紧张素转化酶体外抑制活性的方法。 本发明的技术方案是：在相同的色谱条件下分析，分别测定抑制剂不存在的条件下血管紧张素转化酶与马尿酰组胺酰亮氨酸反应的混合物中马尿酸的峰面积A、抑制剂存在的条件下血管紧张素转化酶与马尿酰组胺酰亮氨酸反应的混合物中马尿酸的峰面积B和抑制剂存在、且不添加血管紧张素转化酶的条件下在马尿酸出峰位置相关肽