药物分析04第四章药物定量分析与分析方法验证概要.ppt

1. 原料药 可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准确 度的另一方法测定的结果进行比较。 2. 制剂 要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入原 料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD。 具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3, 共9个数据来评价 回收率的RSD＜2%；用UV和HPLC法时，一般回 收率可达98%～102%；容量法可达99.7%～100.3% 回收率% = （测定平均值— 空白值）/加入量×100% 要求制备高、中、低三浓度的样品，各测定3次。应 报告已知加入量的回收率，或测定结果平均值与真实值 之差及其可信限。 (2)精密度（precision ）： 定 义: 同一样品多次测量值之间相互接近的程度 表 示：标准偏差(s), 相对标准偏差(RSD) 重复性:同一实验室,同一人多次测定的精密度 中间精密度:同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度 重现性:不同实验室，不同人测定的精密度 (3)专属性（specificity）: 指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性。 鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，均应考察其专属性。 含量测定和杂质测定: 色谱法和其他分离法，应附代表性的图谱，以说明专属性。图中应注明各组分的位置，色谱法中分离度应符合要求。在能获得杂质的情况下，可加到试样中，考察对结果的干扰。在杂质和降解物不能获得的情况下，可用以验证方法和药典方法进行对照；也可用对试样加速破坏的方法，比较两种方法。 鉴别反应: 应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测组分 的样品均应呈现负反应。 (4) 检测限（limit of detection， LOD）： 药物能被检出的最低浓度(μg/ml) 测 定: 信噪比法(S:N=3:1) (5) 定量限（1imit of quantitation，LOQ）： 药物能被定量测出的最低浓度(μg/ml) 测 定: 信噪比法(S:N=10:1) 药品质量标准分析方法验证 ------------性能指标 (6) 线性与范围（linearity and range）： 待测物浓度与响应值成线性关系的浓度范围 线性关系：Y=a+bx （r=0.9999) 线性程度：相关系数 (7) 耐用性（robustness）: 测定条件稍有变动时，对测定结果的影响程度 影响因素：被测溶液的稳定性，流动相的组成和pH，商品柱的品牌，柱温等 药品质量标准分析方法验证 ------------性能指标 检验项目和验证内容： 　　　项目内容　　　 鉴别 杂质测定 含量测定及溶出量测定 定量 限度 准确度 ＋ ＋ 精密度 － ＋ 重复性 ＋ ＋ 中间精密度 ＋① ＋① 专属性② ＋ ＋ ＋ ＋ 检测限 －③ ＋ － 定量限 ＋ － 线性 ＋ ＋ 范围 ＋ ＋ 耐用性 ＋ ＋ ＋ ① 已有重现性验证，不需验证中间精密度 ② 如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充 ③ 视具体情况予以验证 生物样品分析的基本步骤 1. 药物从蛋白结合或缀合物中释出 ⑴ 蛋白变性：如应用三氯醋酸、HClO4、有机溶剂(乙醇、丙酮、乙腈)使蛋白沉淀 ⑵ 盐酸水解 ⑶ 酶消化法：最常使用蛋白水解酶中枯草菌溶素(一种细菌性蛋白分解酶，可在pH 7.0~11.0使肽键降解) 定量分析方法的验证 ----------生物样品分析 （一）特异性 内源性物质不得干扰原药、代谢物 （二）标准曲线 r≥0.9900，至少5个浓度，不许外延 （三）精密度和准确度 RSD≤15％、20％ 相对回收率85～115％（80～120％） （四）最低定量限LOQ 3~5倍t1/2，或1/10～1/20倍Cmax （五）样品稳定性 室温、冻融、冰冻长期 （六）提取回收率（绝对回收率） 一般低于100％，须稳定 （七）质控样品 已知浓度样品均匀放入待测生物样品序列中，以确保定量