纳豆菌细胞固定化材料优化选择的研究.pptVIP

* 纳豆菌细胞固定化材料优化选择的研究 主讲人 ：姚承理 Study on The Immobilizing Technology of Bacillus Natto Cells to Produce Nattokinase 什么是纳豆 纳豆源于中国，纳豆类似中国的发酵豆、怪味豆。 纳豆传入日本后，根据日本的风土发展了纳豆。 古书记载有：“纳豆自中国秦汉以来开始制作。” 吸附法 表面吸附法 交联法 操作简单，符合细胞的生理条件，且不影响细胞的生长。但是吸附容量小，结合强度低。所以此法在工业上尚未得到推广应用。 固定化细胞的方法 包埋法 共价结合法 细胞聚集法 用微生物细胞吸附于固体物质表面的天然倾向制备固定化细胞 某些细胞能够分泌出高分子化合物，使细胞发生吸附作用，有形成聚集体或絮凝体颗粒的倾向。 特点 吸附法 交联法 稳定性好，但反应条件苛刻，操作复杂，而且固定化细胞的死亡率非常高。 固定化细胞的方法 包埋法 共价结合法 利用细胞表面的反应基团与活化的无机或有机载体间反应形成共价键而成为固定化细胞。 特点 吸附法 交联法 所使用化学试剂的毒性可能会破坏细胞，损坏细胞的活性，故此法应用较少。 固定化细胞的方法 包埋法 共价结合法 利用双功能或多功能试剂直接与细胞表面的基团反应，使细胞彼此交联，形成网状结构而制得固定化细胞。 特点 吸附法 凝胶包埋法 交联法 操作简单，符合细胞的生理条件，且不影响细胞的生长。但是吸附容量小，结合强度低。所以此法在工业上尚未得到推广应用。 固定化细胞的方法 包埋法 共价结合法 微囊化法 将细胞包埋在高分子凝胶的细胞网格中。 特点 吸附法 凝胶包埋法 交联法 具有提高细胞密度、降低培养是对细胞的剪切力、与液体培养相近的培养环境、细胞可重复使用的优点。 固定化细胞的方法 包埋法 共价结合法 微囊化法 把分散的细胞等小物质包封在由一层膜构成的微胶囊中的方法。 特点 菌体 一定浓度的包埋剂 混合 滴入交联剂中进行交换 取出固定化细胞小球，无菌水冲洗后备用 具体操作 SA与PVA混合固定化 将融化的SA与PVA混合物和菌悬液混合，用注射器滴入硼酸、CaCl2溶液中，形成球状固定化细胞。 4 113.84 6 12 1.5 5 8 3 61.72 4 9 1.5 4 7 5 52.83 4 11 2 4 6 4 62.91 6 11 1.5 5 5 2 19.68 4 11 0.5 4 4 5 51.67 4 11 0.5 5 3 6 87.92 6 11 1 5 2 4 63.79 6 11 1 4 1 使用批次 酶活mm2/15μL CaCl2浓度/% PVA浓度/% SA浓度/% 硼酸浓度/% 序号 正交实验结果与分析 从上表可以看出，2号的活性较高且使用次数最多，因此这是最好的方案，也就是当硼酸的浓度为5%，SA的浓度为1%，PVA的浓度为11%，CaCl2的浓度为6%时，固定化细胞的强度最好，可以使用6次，活性也很高，15μL发酵液的纤溶圈面积达87.64 mm2。 *