《产淀粉酶菌的分离纯化》实验方案设计.docVIP

产淀粉酶菌的分离纯化一 实验目的 1. 掌握产淀粉酶菌种的分离纯化的原理方法技术 2. 巩固十倍稀释法。 二 实验原理 淀粉酶作用于淀粉时，打开了淀粉分子的糖苷键，从而使淀粉失去粘性，同时使其失去了与碘的显色反应能力，不再与碘结合，从而形成透明圈。产淀粉酶菌株在选择培养基上培养后，会水解淀粉形成水解圈，加碘液染色后，水解圈尤为明显。 三 实验材料 1. 菌种：从菜园中采集土壤样品 . 培养基淀粉培养基蛋白胨 0g，NaCl 0.25g，牛肉膏可溶性淀粉g，蒸溜水 mL。 淀粉琼脂培养基蛋白胨g，NaCl 1g，牛肉膏 g，可性淀粉g，蒸溜水 mL，琼脂 g。 牛肉膏蛋白胨培养基： 蛋白胨g，牛肉膏g，NaCl 1g，琼脂g，蒸馏水mL，pH7.0-7.2。 4. 其他酒精灯接种环试管架三角棒试管培养皿微波炉卢戈氏碘液 四 试验方法取10g，放入盛90mL无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中振动20min，使与水充分混合，使分散开。淀粉培养基①倒平板 将淀粉琼脂培养基融化后倒平板（个），注意平皿中的培养基厚度要均匀 ②土壤稀释液的制备 取1mL，放入盛mL无菌水中振10-1稀释液，以此类推制成10-0-3，10-4，10-5，10-6，10-7和10-8几种稀释度的土溶液。 涂布 将上述培养基的平板底部用记号笔分别写上10-10-6，10-7和10-8四种稀释度字样，每种培养基每种稀释度标记皿，然后用分别10-5，10-6，10-7和10-8四种土样稀释液中吸取0.1ml菌液放入写好稀释度的平板中央位置，用无菌棒在培养基表面轻轻地，室温下静置5-10min。 培养 将平板倒置在37温箱中培养h。 4. 检测 观察细菌的生长情况，打开平板盖子，加入少量卢戈氏碘液于平板，轻轻旋转平板，使碘液铺满整个平板，观察是否有圈的产生。 ①倒平板 将牛肉膏蛋白胨培养基融化后倒平板（个），注意平皿中的培养基厚度要均匀②平板划线 10-5，10-6，10-7和10-8四个稀释度下，每组淀粉琼脂培养基中产生透明圈菌落在牛肉膏蛋白胨培养基平板上划线③培养 将平板倒置在37温箱中培养48h观察细菌的生长情况，打开平板盖子，加入少量卢戈氏碘液于平板种，轻轻旋转平板，使碘液铺满整个平板。能产生透明圈的菌落接种到牛肉膏斜面上保存。五 技术路线 倒平板（淀粉琼脂培养基个） 土壤稀释液制备 涂布 培养（37h） 加碘液（观圈） 倒平板（牛肉膏蛋白胨培养基个） 平板划线（在淀粉琼脂培养基中产生透明圈的菌落） 培养（3748h） 观察可产生圈的菌落的特征