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[农学]研究生微生物遗传育种
工业微生物诱变育种 出发菌株: 野生型菌株 生产菌株 诱变剂: 化学诱变剂 物理诱变剂 生物诱变剂 变株分离筛选: 快速初筛模型 复筛 变株发酵工艺优化: 定向优化 基础优化 变株稳定性考核 工业微生物杂交育种 体细胞杂交育种: 细菌、酵母、霉菌 原生质体杂交育种:原生质体制备、原生质体 再生、原生质体融合 杂交标记选择: 营养缺陷标记、菌落形态标记、孢 子颜色 标记、抗生素抗性标记、温 度敏感标记、 DNA标记 杂交种检出: 细菌—重组体检出 放线菌—杂合体→单倍重组体 酵母—杂合二倍体→单倍化 霉菌—异构体→杂合二倍体→单倍化 提高目的产物的诱变育种 杂交变株发酵工艺优化 杂交变株稳定性考核 工业微生物基因工程育种 基因工程载体:λ噬菌体 质粒载体 柯斯质粒载体 基因工程用酶:限制性内切控酸酶 DNA聚合酶 依赖于DNA的RNA聚合酶 连接酶 激酶 磷酸酶 基因工程菌的主要步骤: DNA制备 目的基因的产出与分离 DNA的连接 重组体导入大肠杆菌 含重组质粒的细菌菌落的鉴定 目的基因的表达 工业微生物育种成功实例 实例之一: 灰黄霉素高产耐前体变株F-208的选育与应用 菌种 Penicillium Parnlum 菌种来源 从福建厦门莲坂油菜地土壤中分离的野生型菌株。 野生型菌株产抗水平 265u/ml 变株F-208产抗水平 37068u/ml ,比野生型菌株提高138倍。 诱变剂 UV+LiCl复合诱变剂 诱变系谱(十八次连续诱变) 技术路线 耐前体抗性定向选育 耐前体—氯离子浓度 由出发菌株的0.3%递增至2.0%, 提高了7倍。 主要成效 彻底改变原料路
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