色谱分析导论教学幻灯片讲义.pptVIP

1 6.1 色谱法及其分类 第六章 色谱分析导论 6.2 色谱流出曲线与基本术语 6.3 色谱分析基本原理 2 6.1 色谱法及其分类 6.1.1 色谱法 6.1.2 色谱法分类 3 6.1.1 色谱法 色谱法（Chromatography）是一种分离分析方法。 它是利用各物质在两相中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些物质在两相中进行多次反复分配，从而达到分离的目的。 色谱法是混合物最有效的分离、分析方法。 4 色谱法早在1906年由俄国植物学家茨维特（M. Tswett）分离植物色素时采用。 将植物叶子的萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内，然后加入石油醚使其自由流下，结果植物叶色素中各组分互相分离形成各种不同颜色的谱带。 这种方法因此得名为色谱法。 6.1.1 色谱法 5 然后将潮湿的碳酸钙挤出玻璃管，用刀将各色带切下，对其中的组分用合适的分析方法分别进行测定。这是经典色谱法，各色素的分离过程与其含量测定过程是离线的，不能连续进行。 以后此法逐渐应用于无色物质的分离，“色谱”二字虽已失去原来的含义，但仍被人们沿用至今。 6.1.1 色谱法 6 6.1.1 色谱法 混合物分离过程：试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配。 一相固定不动，称为固定相。 另一相是携带试样混合物流过固定相的流体(气体或液体)，称为流动相。 两相及两相间的相对运动构成了色谱法的基础。 7 6.1.2 色谱法分类 一、按两相状态分类 1、根据流动相状态 气相色谱（Gas Chromatography, GC） 液相色谱（Liquid Chromatography, LC） 2、根据固定相状态 气固色谱（Gas Solid Chromatography，GSC） 气液色谱（Gas Liquid Chromatography，GLC） 液固色谱（Liquid Solid Chromatography，LSC） 液液色谱（Liquid Liquid Chromatography，LLC） 8 6.1.2 色谱法分类 二、按分离原理分类 根据组分在固定液（固定相）中溶解度的大小而分离。 气液色谱和液液色谱均属于分配色谱。 1、分配色谱（Partition Chromatography ） 9 6.1.2 色谱法分类 2、吸附色谱（Adsorption Chromatography） 根据组分在吸附剂（固定相）上的吸附和解吸能力的大小而分离。 气固色谱和液固色谱均属于吸附色谱。 10 6.1.2 色谱法分类 4、尺寸排阻色谱 利用大小不同的组分分子在多孔固定相中的选择渗透而分离 3、离子交换色谱 利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而分离。 5、亲和色谱 利用不同组分与固定相的高专属亲和力进行分离。常用于蛋白质的分离。 14 样品混合物在流动相的带动下经过固定相，并与固定相发生作用； 由于各组分与固定相相互作用的类型、强弱有差异，因此同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出。 6.2.1 色谱流出曲线 15 各组分先后流出柱子，进入检测器，从而使各组分浓度的变化转变成电信号，然后用记录仪记录，得到由许多峰形组成的色谱图。 图中每个峰代表样品中的一个组分，峰面积代表该组分的含量。 6.2.1 色谱流出曲线 邻苯二胺、间苯二胺、对苯二胺的色谱分离图 17 6.2.1 色谱流出曲线 18 1.基线 无试样，仅有纯流动相通过检测器时，检测到的信号即为基线。 6.2.2 色谱基本术语 峰高 基线 稳定的基线应该是一条水平直线。 19 2. 峰高 色谱峰顶点与基线之间的垂直距离。 6.2.2 色谱基本术语 20 3.保留值 （1）时间表示的保留值 保留时间(tR)：组分从进样到柱后出现浓度极大值时所需的时间； 死时间(tM)：不与固定相作用的物质 (如空气)的保留时间； 6.2.2 色谱基本术语 调整保留时间（tR ＇）：tR＇= tR－tM 21 （2）用体积表示的保留值 保留体积（VR）： VR = tR×qv qv为柱出口处的载气流量，用皂膜流量计测出。 单位：m L / min。 6.2.2 色谱基本术语 调整保留体积(VR ＇)： V R＇ = VR －VM 死体积（VM）： VM = tM ×qv 22 4. 相对保留值r21 组分2与组分1调整保留值之比： r21 = t´R2 / t´R1