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[科技]PCR技术及其应用
转基因动植物的成功 82年Palmiter等将生长激素基因导入小鼠 我国将蛋白酶抑制剂基因转入棉花获得抗棉铃虫的棉花株。 目 录 PCR的反应原理 PCR的类型和应用 PCR示例 PCR1 PCR2 1、材料：含1Kb插入片段的克隆载体Pmd18-T 质粒DNA 2、仪器：微量移液器及吸头、PCR仪及PCR管 琼脂糖凝胶电泳设备 3、试剂：10XPCR 反应缓冲液 25mmol/L MgCl2 10mmol/L dNTP 10μmol/L 引物1和引物2 二、实验材料、仪器和试剂 1.反应体系（50μl体系）： 10 X PCR反应缓冲液 25mmol/L MgCl2 10mmol/L dNTP 10μmol/L 引物1 10μmol/L引物2 模板DNA TaqE 补充水 三、操作步骤 10 X Buffer 10 X P1+P2 10 X T 10 X E 2.按照如下体积向PCR管中按顺序加入各试剂并混匀： 三、操作步骤 10 X Buffer 5.0 μL 10 X P1+P2 5.0 μL 10X T 5.0 μL 10 X E 5.0 μL 50 μL 水 25.0 μL dNTP 5.0 μL 3.PCR扩增程序： 94℃ 5-10min（预变性） 94 ℃ 30S 55 ℃ 40S 72℃ 30S 72℃ 5-10min（后延伸） 4 ℃ 保温 30Cycles 三、操作步骤 Main Run Enter List Edit File Lid 运行已有程序 已有程序菜单 删除已有程序 新建反应程序 编辑已有程序 热盖关闭调节 Enter Enter abcdefghi# jklmnopqr# Name #stuvwxyz# In Use! .,-+/():=# Enter PCR1 Control Method BLOCK Sim-Tube 输入文件名,满8个字符自动生成程序名,不满8个字符时用#终止 BLOCK:屏幕显示样品台温度(样品台温控方式) Sim-Tube:屏幕显示反应液温度(模拟管温控方式) Enter PCR1 Segment #1 Hold Cycle END 选择预变性保温 循环内第一步温度和时间 Enter PCR1 Hold at 94C Hold for 5m0s 预变性温度和时间 Enter PCR1 Segment #2 Hold Cycle END 3 step PCR 循环参数设置 Step #1 94.0C Hold 0m30s 循环内步骤数 Step #1 Option？ No yes 不需要拓展功能 Step #2 55.0C Hold 0m40s 循环内第二步温度和时间 Step #2 Option？ No yes 不需要拓展功能 Step #3 72.0C Hold 0m30s 循环内第三步温度和时间 不需要拓展功能 设置循环数 后延伸保温 后延伸温度和时间 Step #3 Option？ No yes Total Cycle= 35 Segment #3 Hold Cycle END Hold at 72.0C Hold for 10m0s Segment
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