β-内酰胺类抗生素高分子聚合物测定法应用指导原则.PDFVIP

β- 内酰胺类抗生素高分子聚合 物测定法应用指导原则  本法用于β- 内酰胺类抗生素原料药及其 制剂在生产或贮存过程中产生的高分子 聚合物及在生产过程中未除尽的可能引 起过敏反应的高分子物质的检查。  抗生素药物高分子聚合物系对药品中 分子量大于药物本身的杂质的总称。 β- 内酰胺类抗生素药高分子聚合物的分子 量一般在 1000-5000道尔顿，个别可达 到10000道尔顿。  本方法系统适用性试验应注重高分子杂 质峰与单体峰的分离度，并应考察对照 测定系统与供试品测定系统中兰色葡聚 糖2000溶液峰的保留时间 （Kav=0 ）比 值、理论板数与拖尾因子。  1 ．根据β- 内酰胺类抗生素高分子杂质 的分子量特点，采用凝胶色谱分离。凝 胶色谱填料首选为葡聚糖凝胶G-10 （Sephadex G 10），也可用葡聚糖交联 糖琼脂凝胶 （Superdex peptide ）等。  1.1 Sephadex G 10其排阻分子量为700 道尔顿，因此除部分寡聚物外，β- 内酰 胺类抗生素高分子杂质在色谱过程中均 不保留，即所有高分子杂质表现为单一 色谱峰，其Kav=0 。  1.2 兰色葡聚糖2000 在色谱过程中不保 留, 所以可用兰色葡聚糖2000 的保留时 间来表示高分子杂质的保留特性。  2 ．流动相选择及对色谱行为的影响  2.1 高分子杂质测定用流动相一般选用 磷酸盐缓冲液，也可根据药品性质选择 不同盐的缓冲液。  2.2 缓冲液的离子强度对溶质的保留行 为与响应值有影响。  2.3 缓冲液的种类、pH、以及洗脱速度 对溶质的色谱行为均有影响。  3 ． 检测器选用UV检测器，波长一般 为UV 254nm或280nm 。  4 ．系统适用性试验中应进行以下试验：  4.1 分离度：照分子排阻色谱法项下规定： 分离度计算公式为：  R= 高 聚 物 的 峰高 2.0 单体与高聚物峰间的谷高  分离度试验用溶液配置时，可加入一定 量的兰色葡聚糖2000 ，使聚合物的峰面积 达到该品种限度规定的1-2倍。  4.2 以兰色葡聚糖2000 的保留时间表示 高分子杂质的保留特征，并规定对照溶 液色谱峰及高分子杂质色谱峰与兰色葡 聚糖2000色谱峰的保留时间的比值，一 般为0.93-1.07  4.3 对照溶液进样的重复性，连续进样 5针，峰面积相对标准偏差 （RSD ）应 ≤5.0%。  5 ．用自身对照外标法计算高分子杂质限度：  5.1 β- 内酰胺类抗生素高分子杂质具有高度不 均一性和不确定性，高分子杂质本身不稳定， 对照品不易制得，经试验表明;在特定条件下 （一般在以流动相为水的条件下），β- 内酰胺 抗生素由于分子间的氢键，静电、疏水相互 作用等可形成表观分子量较大的缔合物，在 Sephadex G 10凝胶色谱系统中的色谱行为与 高分子杂质相同，都在Kav=0处表现为单一色 谱峰，利用该特点，制定自身对照外标法。  5.2 个别品种由于本身结构的影响在特定的条 件下仅有少部分分子间发生缔合或缔合物本 身又不稳定时，应根据药物本身分子结构特 征改用其他可形成缔合物结构类似品种替代， 并用校正因子计算结果。  6 ．规定供试品溶液进样量与高分子杂质峰面 积间的相关性要求，相关系数(r) 应不小于 0.99 。