河豚毒素研究及其免疫研究教材.pptxVIP

河豚毒素研究及免疫应用国家战略忽悠局YN-ZH1604号文件延时文字，不要可以删除目录页提纯检测技术作用机理概述免疫应用参考文献洗脱、吸附、过滤适应性进化河豚及河豚毒素34521延时文字，不要可以删除河豚毒素毒性是自然界中所发现的毒性最大的/item/%E7%A5%9E%E7%BB%8F%E6%AF%92%E7%B4%A0神经毒素之一，其毒性比氰化物还要高1250多倍，0.5mg即可致人于死命。毒素对肠道有局部刺激作用，吸收后迅速作用于神经末梢和神经中枢。雌性雄性冬春夏秋卵巢脾脏肝脏血液眼睛鳃耙皮肤精巢一般肌肉中不含有河鲀毒素，但河鲀死后内脏中的毒素可渗入肌肉，此时鱼肉也含有少量毒素。河鲀毒素化学性质和热性质均很稳定，盐腌或日晒等一般烹调手段均不能将其破坏，只有在高温加热30min以上或在碱性条件下才能被分解。延时文字，不要可以删除中毒症状肠胃症状恶心、呕吐、腹痛或腹泻神经麻痹症状口唇。舌尖、指端麻木→全身麻木，眼睑下唇，四肢无力，肌肉软瘫呼吸、循环衰竭症状呼吸困难、血压下降、瞳孔异常、言语障碍、昏迷→呼吸衰竭延时文字，不要可以删除作用机理研究表明，TTX 属小分子非蛋白类成分神经毒素，服用后首先迅速由胃肠道吸收，然后进入血液中，迅速抑制中枢神经和末梢神经系统，引发神经传导阻滞，造成神经麻痹，严重的会引发脑干神经麻痹导致呼吸循环衰竭而死亡，具有潜伏期短、死亡率高的特点。 深入药理研究表明，TTX 也是一种电压敏感的钠通道外口特异性阻滞剂，在较低浓度下就能通过与细胞膜上受体结合，再通过关闭机制使钠离子通道h闸门关闭，即选择性抑制钠离子通过神经细胞膜而允许钾离子、氯离子通过，具有高度专一性，使细胞膜失去可极化状态，从而抑制甚至阻断了神经-肌肉的兴奋与传导过程，导致神经肌肉活动障碍，严重者可发生麻痹状态并可引起呼吸中枢麻痹、血压下降、脉搏迟缓，最终可能因呼吸停止和循环衰竭而死亡。生物活性TTX 是一种电压敏感的 Na+通道外口特异性阻滞剂，其麻醉作用是普鲁卡因的 4 000 倍，可代替吗啡、杜冷丁起镇痛作用，且不成瘾，并有解痉、降压、抗心律失常等作用。在医学方面，TTX 通过阻断快速钠离子通道来治疗某些心律失常具有潜在可能性。必威体育精装版研究表明 TTX 是神经生理学、肌肉生理学和钠离子通道药理学研究的非常有用的工具。已经证明 TTX可有效治疗某些疾病如癌症晚期造成的疼痛等。虽然 TTX 是重要的选择性钠离子通道抑制剂，然而最近的研究表明，TTX 也表现出对犬类心脏细胞L 型钙离子通道的阻断作用。适应性进化在对河豚毒素没有免疫力的生物体内，钠通道的 α-亚基上存在河豚毒素的受体，河豚毒素与 α-亚基门孔附近的氨基酸残基结合，阻止钠离子进入细胞内，引起河豚毒素中毒。而河豚体内细胞的构造与其他生物不同，河豚体内还存在可以和河豚毒素结合的蛋白质，从而使河豚对体内的河豚毒素具有免疫力。比较红鳍东方鲀、黑青斑东方鲀 和斑马鱼的基因序列图谱，发现红鳍东方鲀和黑青斑东方鲀骨骼肌的 Nav1.4通道发生了变异，正是这种变异使河豚具有抵抗河豚毒素的能力。红鳍东方鲀和豹纹东方鲀的变异类似，都是在 Na v 1.4 通道的 401 位点上发生了取代，取代为一个折叠程度更高的不饱和氨基酸，河豚的这些氨基酸是不与河豚毒素结合的，从而也就不能对河豚的钠通道造成影响。适应性进化通过克隆调控豹纹东方骨骼肌 Na v 1.4 通道表达的 cDNA，发现 Nav1.4通道区域Ⅰ401位点处存在一个不饱和氨基酸，即天冬酰胺。通过基因工程把不饱和氨基酸移植到对河豚毒素敏感的小鼠骨骼肌 Na v 1.4 通道处，移植的不饱和氨基酸的折叠程度越高，小鼠抵抗河豚毒素的能力越强。当不饱和氨基酸的折叠程度大于取代位点氨基酸折叠程度的2500倍时IC50(50%Na+通道发生阻断时河豚毒素的浓度)提高至47μmol/L。河豚对河豚毒素具有免疫力是基因变异的结果，更是适者生存、长期自然选择的结果。河豚对河豚毒素的适应性进化为河豚提供了更大的生存空间，也为人类研制河豚毒素中毒后的解毒药品提供了依据。分离提纯及检测方法对河豚毒素的分离提取研究首先是晶化问题。1909 年日本学者田园良纯用醋酸酸化后用铅盐沉淀法分离，再用醋酸-乙醚重结晶。1950年日学者横尾晃采用氧化铝柱层析，以水为洗脱剂洗脱，得到河豚毒素的结晶 。 目前大多采用离子交换法、活性炭柱层析及凝胶柱层析、吸附树脂等方法分离。国际上分离河豚毒素多采用层析法。把富含毒素的样品绞碎，用醋酸浸提，浸提液经离心，合并上清液，加热除蛋白质，再减压浓缩，萃取脂肪。之后经过冷冻干燥或再减压浓缩，浓缩液经多次层析洗脱，即可得到纯度非常高的样品 。 国内分离河豚毒素的方法主要有活性炭吸附法苦味酸盐法的氨解树脂吸附洗脱法和滤膜过滤法