Agilent1200型高效液相色谱仪验证方案.docVIP

中心化验室Agilent1200型 高效液相色谱仪验证 目 录 （一）、概述 （二）、验证目的 （三）、验证实施小组成员及有关责任 （四）、验证文件 （五）、合格标准 （六）、验证方法和步骤 （七）、验证结果分析和综合评价 （八）、最终评价 （九）、验证周期 （十）、验证记录 （一）、概述 高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。 Agilent1200型高效液相色谱仪由四元输液泵、自动进样器、色谱柱及柱温箱、VWD检测器和色谱数据处理化学工作站组成。 （二）、验证目的 检查并确认高效液相色谱仪运行性能符合要求。 （三）、验证实施小组成员及有关责任 验证实施小组组长：负责协调及异常情况的处理；操作员：负责验证的具体操作工作；QA：负责监督实施本方案。 （四）、主要验证文件 高效液相色谱法 中华人民共和国国家计量检定规程 液相色谱仪（JJG705-2002）、 Agilent1200VWD检测器说明书、 Agilent1200溶液传输单元说明书、 中华人民共和国药典2010年版二部、 Agilent1200操作说明书 安装手册和维修手册。 （五）、合格标准 验证部件 验证项目 合格标准 输液泵 流量设定值误差SS 0.5ml/min:＜5%；1.0ml/min:＜3%；2.0ml/min:＜2% 流量稳定性误差SR 0.5ml/min:＜3%；1.0ml/min:＜2%；2.0ml/min:＜2% 柱温箱 柱箱温度设定值误差ΔTS ＜±2℃ 柱箱控温稳定性TC ≤1℃ 自动进样器 进样量准确度误差 ≤±2% 检测器 基线噪声 ≤ 2×10－5AU 最小检测浓度 ≤1×10－7g/mL(萘的甲醇溶液) 基线漂移 ≤5×10－4AU/h 整机性能 定性测量重复性误差 RSD≤0.5% 定量测量重复性误差 RSD≤1.0% （六）、验证方法和步骤 6.1验证方法 整个验证过程分为单个部件的验证和整机验证。验证时一般先验证泵、柱温箱、自动进样器的性能，接着是检测器的性能，最后是整机的性能验证。 6.2验证步骤 6.2.1输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定 将仪器的输液系统，进样器、色谱柱和检测器联接好，以甲醇为流动相，流量设为1.0mL/min，按说明书启动仪器，待压力平稳后保持10分钟，按表1设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地收集，称重。按式(1)、式(2)计算 SS和 SR。 表1 流量设定值（mL/min） 0.5 1.0 2.0 测量次数 3 3 3 流动相收集时间（min） 10 5 5 SS＝(Fm－FS)/FS×100%……(1) SR＝(Fmax－Fmin)/F×100%……(2) 式中：SS——流量设定值误差(％)； SR——流量稳定性误差(％)； Fm＝(W2－W1)/ ρT·t，流量实测值(mL/min)； W2——容量瓶＋流动相的重量(g)； W1——容量瓶的重量(g)； FS——流量设定值(mL/min)； ρT——实验温度下流动相的密度(g/cm3)； t——收集流动相的时间(min)； Fmax——同一组测量中流量最大值(mL/min)； Fmin——同一组测量中流量最小值(mL/min)； F——同一组测量值的算术平均值(mL/min)。 输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定记录见附录一 6.2.2柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定 将数字温度计探头固定在柱温箱内，选择35℃和45℃进行检定。按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值。平均值与设定值之差为ΔTS，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性TC。 柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定原始记录见附录二。 6.2.3自动进样器进样量准确度误差的检定 取1.5ml进样瓶装入1ml水，用天平精密称定其重量，然后置于自动进样器上让其进样10次，每次50μl。进样完成后再精密称定其重量，由重量差计算进样量准确度。 自动进样器进样量准确度误差的检定原始记录见附录三。 6.2.4检测器的检定 6.2.4.1检测器基线噪声和基线漂移的测定 取C1