简述乙型肝炎病毒调控肝卵圆细胞增殖的研究.docVIP

简述乙型肝炎病毒调控肝卵圆细胞增殖的研究 摘要：在人类肝脏疾病，包括病毒性肝炎，酒精性肝炎，胆道阻塞性疾病， 原发性肝癌，及试验动物的肝再生模型中，均发现有肝脏卵圆细胞激活和增殖。普遍认为肝脏卵圆细胞正常时定植于胆管树小分支中，激活后的卵圆细胞在经过短暂的扩增后即分化为肝细胞和胆管细胞，从而代偿受损的肝实质和肝脏功能。肝再生是肝脏在受到病毒，化学毒物，致瘤物等因素的损伤作用后，自身的修复功能。肝脏具有强大的自我修复作用，在正常肝再生中，如鼠肝切模型（PH, partial hepatectomy），肝再生主要由肝细胞完成，而在非正常肝再生中，如严重或慢性的病毒型肝炎，肿瘤，化学毒物引起的肝损伤；此时，肝细胞的再生作用受到阻抑，肝脏的再生修复则有多种肝脏定植细胞共同完成，主要包括卵圆细胞，小肝细胞样祖细胞（SHPC, smallhepatocyte-like progenitor cell）甚至 1%-2%来源于骨髓干细胞。 关 键 词：乙肝病毒；肝细胞；卵圆细胞；周期蛋白 乙型病毒 HBV 感染的肝脏中，存在卵圆细胞的激活和增殖，并且卵圆细胞增殖的数量和炎症的严重程度密切相关。那么，是哪些因素参与激活或者促进肝炎后肝脏中卵圆细胞的增殖呢？目前研究认为，肝脏再生中的卵圆细胞的增殖机制主要和各种炎症介质，细胞因子的作用有关。包括乙型肝炎在内的肝损伤刺激人体内在免疫反应和适应性免疫反应，导致了 kupffer 细胞，成熟肝细胞，淋巴细胞，释放的各种炎症介质，细胞因子，补体系统，共同调控卵圆细胞的激活和增殖。但是, 并不能排除，在不依赖于免疫系统所释放的炎症介质、细胞因子的作用下，乙型肝炎病毒HBV 对肝脏卵圆细胞的激活和增殖有直接的促进作用。 乙型肝炎病毒可以感染卵圆细胞。乙肝病毒编码蛋白是否直接参与肝炎后肝再生中卵圆细胞的增殖调控至今未有报道。病毒学研究表明，长度为 3.2 kb 的乙肝病毒HBV 基因组包含四个重叠的开放阅读框（ORFs）编码表面抗原（HBsAg），核心抗原和E抗原(HBcAg, HBeAg)，一个聚合酶(Pol)和一个乙型肝炎病毒 X 基因(HBV X)。乙型肝炎病毒 X 基因所编码 X 蛋白（HBX）是一个约 17 kDa 的小分子蛋白, HBX 定位主要是细胞质，可以激活或上调多种信号转导通路，另有少量于胞核中作为多功能的转录因子可以调控多种目的基因的转录。临床研究表明，在乙型肝炎所联系的肝硬化和原发性肝癌中，都报道有肝脏卵圆细胞的大量增殖。在乙型肝炎相关的肝硬化及原发性肝癌中也存在极高的 HBX 表达阳性率。在乙肝患者的血清中也检测到 HBxAb的存在。因此可以推测，HBX 的高表达和肝炎后肝脏卵圆细胞的增殖之间可能存在相关性。本研究的结果也首次证实了乙型肝炎病毒编码的 HBX 蛋白可以直接促进肝脏卵圆细胞的增殖，并不依赖于病毒感染引起的炎症反应，从而直接参与了肝炎后肝脏再生的调控机制。 关于 HBX 蛋白促进肝脏卵圆细胞增殖的具体分子生物学机制，我们进行了进一步的研究和探讨。 细胞周期理论认为，细胞正常的分裂、增殖、分化与衰老等生物进程是维持机体自身的稳态的基础。负责细胞周期调控的相关蛋白称为调控子（cell cycle regulator），包括细胞周期蛋白(CD, cyclins)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK，cyclin dependentkinase)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物(CKI)三大类。调控点通常为 G1/S, G2/M和有丝分裂中期/后期的交界处, 细胞周期的各调控子通过对调控点的运作影响细胞周期进程。因此，我们对卵圆细胞 HBX-EGFP-LE/6 增殖分子机制的研究即从细胞周期调控子入手，通过研究得出结论，HBX 可以显著上调 G1 期细胞周期蛋白 cyclinD1的表达水平。并且 p27 的蛋白表达水平也有一定程度的下调。CyclinD1 维持在的高水平表达可以部分解释 HBX-EGFP-LE/6 细胞增殖加快的原因。但是 HBX 究竟通过何种途径或依赖于何种方式上调 cyclinD1 的表达以及促进卵圆细胞的增殖仍不完全清楚。 在进一步分析 HBX 蛋白在胞内广泛的分子生物学效应的基础上，我们又提出，在肝脏卵圆细胞内，扮演多种激活及干预功能的 HBX 蛋白是否通过 MAPK 通路来影响卵圆细胞的细胞周期进程或增殖？或者，MAPK 信号通路是否是 HBX 通过胞内复杂网络系统影响增殖活性的最终共同通道？除此，为保证研究的相对系统性，我们还研究了 HBX 相关，且在细胞增殖及周期调控中发挥重要作用的信号转导通路，PI-3K/Akt 通路。 促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAP 激酶, MAPK)通路是关系细胞增