(饲料科学课件）植物基因组DNA快速抽提试剂盒-生工.pdfVIP

植物基因组 DNA 快速抽提试剂盒 试剂盒组成 组分 SK8231，50 次 SK8232，100 次 Buffer PCL 24 ml 48 ml Buffer PP 12 ml 24 ml TE Buffer (pH 8.0) 10 ml 20 ml 操作手册 1份 1份 保存方法及注意事项： 常温运输，室温（15-25°C）保存，有效期为一年，4°C 保存时间更长。 Buffer PCL 中含有刺激性化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套， 避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水 或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。 产品介绍 本试剂盒是生工生物工程（上海）有限公司必威体育精装版研制成功的一种植物基因组 DNA 快速抽提试剂盒。 从100 mg 新鲜植物样品中可以获得5-15 µg DNA，OD260/OD280 比值一般 为1.7-1.9。抽提出的DNA 可用于酶切、PCR、文库构建、Southern blot 等相关 实验。 标准操作步骤 自备材料：小型高速离心机（最大离心力≥12,000 × g）、1.5 ml 离心管、 75% 乙醇、异丙醇、RNase A （20 mg/ml）、β-巯基乙醇等。 每次使用前请检查Buffer PCL 是否出现沉淀，如有沉淀，请于65°C 溶解后使 用。 1. 取50-100 mg 新鲜植物组织用液氮研磨成粉末，转移至1.5 ml 离心管中。 ✔ 研磨是否充分，将会影响基因组DNA 的得率。磨碎标准是在加入Buffer PCL 后，在 溶液中没有大的组织团块。 ✔ 样品尽量不要采用植物的微管组织。 ✔ 对于含水量较多的样品，请尽量在研磨和裂解前挤干去除水分。 2. 加入400 µl Buffer PCL ，8 µl β-巯基乙醇，震荡混匀。65°C 水浴45 min 至样 品完全裂解。 ✔ 水浴过程中，每10 分钟颠倒混匀一次，可促进样品裂解。 ✔ 如需得到无RNA 的DNA ，可在水浴后加入20 µl 的RNase A （20 mg/ml ），室温放 置2-5 分钟。 3. 加入200 µl Buffer PP，充分颠倒混匀，-20°C 冰箱放置5 min 。 4. 室温10,000 rpm 离心5 min，将上清转移到新的1.5 ml 离心管中。 5. （可选步骤）加入500 µl 氯仿（自备），颠倒混匀，室温12,000 rpm 离心5 min，取上清。 ✔ 此步骤可进一步去除蛋白等杂质，可以获得纯度更高的DNA。 6. 加入等体积的异丙醇，颠倒5-8 次使之充分混匀，室温放置2-3 min 。室温 10,000 rpm 离心5 min，弃上清。 ✔ 加入异丙醇后可看见白色絮状沉淀，如果沉淀较少，可使用预冷的异丙醇或加入异丙 醇后，于-20°C 冰箱放置20 分钟再离心。 7. 加入1 ml 75%乙醇，颠倒漂洗1-3 min，10,000 rpm 离心2 min ，弃上清。再重复 此步骤一次。 ✔ 漂洗时一定要使沉淀悬浮起来。 8. 开盖室温倒置5-10 min 至残留的乙醇完全挥发。 ✔ 此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。 ✔ 如果残留的乙醇有挂壁现象，倒掉液体后再短暂离心，将残液用移液器吸出。然后开盖室温 放置5-10 分钟至残留的乙醇完全挥发。 9. 得到的DNA 用50-100 µl TE Buffer 溶解。提取的DNA 可立即进行下一步实验或- 20°C 保存。 ✔ TE Buffer 为10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA, pH 8.0.