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第二页 生物技术09级3班第3小组 什么是转基因作物 转基因作物，是指利用分子生物学技术将某些生物的基因转移到其他物种中，使遗传物质得到改造的生物，兼具高产优质、多抗等诸多优点。 由于目前尚缺乏科学依据证明转基因作物及产品的安全性，对人类健康和环境潜在的风险已引起广泛关注和忧虑。如何准确检测和识别转基因作物及其产品，也成为人们关注的热点。 第三页 生物表型检测法 PCR 检测法 基因芯片检测法 中心法则： DNA ↓ RNA ↓ 蛋白质 ↓ ↓ 表现型 Southern杂交 Northern杂交 特异蛋白质检测法（双向电泳、免疫荧光杂交、western杂交 1.生物表型检测法 观察植株是否具有转基因的特定性状，以此区分转基因和非转基因幼苗。 该方法的优点是可利用实验室现有的设备和条件，成本低廉，不仅可以测定识别转基因产物，而且可判断其活性。但其缺点是只能测定活的植株，不同的转基因性状需单独测定，且需要的时间较长。 1.生物表型检测法 1.生物表型检测法 迄今，最好的定性转基因植株分析方法是利用PCR，但其也有缺点：容易出现假阳性结果。还有每个性状需分开测定。 测定导入作物植株基因的特定DNA 序列是否存在。PCR可对插入两个已知DNA 序列之间的特定DNA 序列进行特别和灵敏的扩增(多重)。 2、PCR 检测法 PCR 基本测定主要包括3 个步骤： ① DNA 提取和纯化。 ②插入DNA 的PCR 扩增。 ③ PCR 扩增产物存在的电泳确认。 2 、PCR 检测法 ?定量PCR 测定法（竞争PCR法）：根据目的序列合成一种突变的DNA 序列作为竞争模板，竞争模板与目的序列十分相似，可共用一套引物，根据扩增后这两种DNA 的含量和已知的竞争模板起始DNA 浓度，确定目的模板的起始DNA浓度。 2、PCR 检测法 2、PCR 检测法 ②实时定量PCR，一种在PCR 反应体系中加入荧光基团，利用对荧光信号积累的实时检测来监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 该技术不仅实现了对DNA模板的定量，而且具有灵敏度和特异性高、能实现多重反应、自动化程度高、无污染、实时和准确等特点。该方法不需进行电泳，计算机将直接记录和告知结果。 2、PCR 检测法 2、PCR 检测法 转基因产品检测芯片法将当前通用的报告基因、抗性基因、启动子和终止子的特异片段(靶片段)固定在玻片上制成检测芯片。 将从待检样品中提取的DNA 扩增、标记后与检测芯片进行杂交，杂交信号由扫描仪扫描后再经计算机软件进行分析判断。 3、转基因芯片法 3、转基因芯片法 该技术具有如下特点： ①选择检测的报告基因是具有明显区别于受体细胞遗传背景的选择标记，通常是在离体条件下易于检测的酶或发光蛋白 ②综合了PCR和分子杂交的优点，用量少，快速而且准确。 ③芯片具有高密度、高通量的优点，可同时检测报告基因、抗性基因、启动子和终止子，非常适合于转基因作物及加工品的检测，具有广阔的发展应用前景。 ④检测结果直接由计算机分析软件进行处理，使得结果更加科学、准确。 3、转基因芯片法 3、转基因芯片法 将DNA分子经酶切及琼脂糖凝胶电泳按大小分离后，用NaOH处理使之变性，再通过毛细管作用或电转移把凝胶中的DNA片段转移到尼龙膜上，然后与标记的核酸探针进行杂交，最后通过放射自显影、显色等方法检测杂交信号。 通过Southern杂交可以检测未知DNA样品中是否存在与探针同源的DNA序列。 4、Southern杂交 将RNA分子经酶切及琼脂糖凝胶电泳按大小分离后，用甲醛处理使之变性，再通过毛细管作用或电转移把凝胶中的RNA片段转移到尼龙膜上，然后与标记的核酸探针进行杂交，最后通过放射自显影、显色等方法检测杂交信号。 Northern杂交是从RNA水平检测目的基因的表达量和大小的试验方法。。 5、Northern杂交 6、特异蛋白质检测法 双向电泳 免疫胶体金技术 免疫酶标技术 免疫荧光杂交 western杂交 6、特异蛋白质检测法 ---双向电泳技术 双向电泳技术是目前使用最广泛的一种高分辨率的蛋白质分离技术。 2-DE技术利用蛋白质的等电点差异完成第一向电泳分离，随后利用分子量差异进行二维电泳分离后。比较分析不同样品的蛋白质的种类和含量。 * * 2009-09-19