1.1_DNA重组技术的基本工具1.ppt

每100kg 猪或牛的胰腺中仅可提取4~5g。;专题1 基因工程;基因工程的概念;基础理论和技术发展催生了基因工程;问题探讨：;解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？;一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀”;⒉种类与命名：; T;Go back;限制酶的识别序列：;SmaⅠ;　; 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线（如图），中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向、对称、重复排列的。;寻根问底(P4);思考与探究 P7;要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？;……GAATTC…… ……CTTAAG……;注意：同种限制性内切酶切割不同的DNA分子肯定产生相同的末端。 不同的限制性内切酶切割不同的DNA分子也能产生相同的末端。;例.基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。根据图示判断下列操作正确的是： 已知:限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC— ， 限制酶II的识别序列和切点是—↓GATC—。;1．已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点，如图中箭头所指，如果该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断，则会产生a、b、c、d四种不同长度的DNA片段。现有多个上述线性DNA分子，若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经该酶切后，这些线性DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是 A．3 B．4 C．9 D．12 答案：C; 2.右图所示为限制酶切割某DNA分子的过程，从图中可知，该限制酶能识别的碱基序列及切点是 A.CTTAAG，切点在C和T之间B.CTTAAG，切点在G和A之间C.GAATTC，切点在G和A之间D.GAATTC，切点在C和T之间;复习提问;二、“分子缝合针” —— DNA连接酶; 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，;　;③类型：;;例.限制酶在DNA的任何部位都能将DNA切开吗？以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段:你是否能用DNA连接酶将它们连接起来？ ;载体必须具备的条件： 1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； 2、具有一至多个限制酶切点，以便与外源基因连接 3、具有某些标记基因，便于进行筛选。 （如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ）;常用的载体：质粒，还有λ噬菌体的衍生物， 动植物病毒等;① 质粒;3、天然的DNA分子可以直接用做基因工程载体吗？为什么？;4、DNA连接酶有连接单链DNA的本领吗？;2.“分子缝合针”——DNA连接酶 (1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较 ①相同点：都缝合磷酸二酯键。 ②区别：E·coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。 (2)与DNA聚合酶作用的异同:----------------------DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。 3.“分子运输车”——载体 （1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。 ②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。 ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 （2）最常用的载体是--质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 （3）其它载体： λ噬菌体的衍生物、动植物病毒;1．下列关于限制性核酸内切酶的叙述中，错误的是（ ） A ．它能在特殊位点切割DNA分子 B ．同一种酶切割不同的DNA产生的黏性末端能够很好 地进行碱基配对 C ．它能任意切割DNA，从而产生大量DNA片段 D ．每一种限制性核酸内切酶只能识别特定的核苷酸序列 ;2．在基因工程中，切割质粒和含有目的基因的DNA片段，需要使用 （ ） A ．同种限制性核酸内切酶 B ．两种限制性核酸内切酶 C ．同种DNA连接酶 D ．两种DNA连接酶;3．DNA连接酶的作用是（ ） A ．使DNA子链和母链之间形成氢键 B ．使黏性末端之间形成氢键而相连 C ．连接DNA分子中脱氧核苷酸和磷酸之间的化学键 D ．以上都不对;4．在用基因工程技术