浅析三联消石疗法对肝内胆管结石的治疗机理.docVIP

精品论文 参考文献 浅析三联消石疗法对肝内胆管结石的治疗机理 杜育海 曹菁 　　【摘 要】 目的 探讨三联消石疗法对肝内胆管结石的疗效及治疗机理。方法 应用雄性豚鼠建立肝内胆管结石模型，对比观察应用三联消石疗法后，造模组豚鼠胆汁中C反应蛋白、黏蛋白及其肝脏超微结构、肝内胆管结石成石率的变化。结果 采用三联消石疗法豚鼠胆汁中C反应蛋白及黏蛋白含量明显降低（P lt;0.05），电镜观察发现其肝脏超微结构明显改善，肝内胆管成石率显著降低（P lt;0.05）。结论 三联消石疗法可降低豚鼠成石胆汁中C反应蛋白、黏蛋白的含量，并改善肝脏超微结构，逆转成石胆汁，从而起到治疗肝内胆管结石的作用。 　　【关键词】 三联消石疗法； 肝内胆管； 结石； 豚鼠； 电镜 　　肝内胆管结石主要为胆色素结石，其病因病机至今仍未阐明。目前认为，胆色素结石的形成与胆红素的过饱和沉淀、胆汁中黏蛋白及其他蛋白质比重的增多、胆道动力学异常等因素有关。胆汁中C反应蛋白及免疫机制、氧自由基等都参与胆色素结石的形成[1] 。胆汁中涉及炎症反应环节变化的C反应蛋白、黏蛋白等，与胆色素结石的形成密切相关。目前，临床对肝内胆管结石的治疗多采用手术，如肝叶或肝段切除、重建胆管通路等，或再配以溶石、碎石、取石相结合的治疗措施，然疗效欠佳。近年来，中医中药对胆道疾病的治疗优势愈发明显，可以预见，中西医结合治疗肝内胆管结石可能会成为其发展的方向[2] 。 　　我们在临床运用三联消石疗法（中药、针刺运动治疗、推按运经仪及部分西药）治疗肝内胆管结石取得了较好疗效的基础，并用该法肝内胆管结石豚鼠模型胆汁中C反应蛋白及黏蛋白的含量，及其肝脏超微结构、肝内胆管结石成石率进行了进一步的观察和研究，现报道如下： 　　材料和方法 　　1．实验动物　 　　普通豚鼠60只，月龄2～3个月，体重250plusmn;20g，采用笼养方式。 　　2．实验药物和致石方法 　　中药汤剂补气养肝汤、疏肝通胆汤为山东青岛中西医结合医院的院内制剂。补气养肝汤由黄芪、党参、白术、茯苓等中药组成；疏肝通胆汤由大黄、茵陈、栀子、柴胡等重要组成。盐酸林可霉素注射液，规格：0.3 g/ ml。 　　3．动物分组、造模及药物处理　 　　取豚鼠60只，随机分成3组，每组20只。每笼饲养豚鼠5只，先笼养1周以适应环境，然后进入实验状态。 　　3.1 正常对照组 　　每只每日喂适量青饲料并喂正常颗粒饲料50g ，喂养90d ，分上下午进食，并每日喂适量青饲料。 　　3.2 造模对照组 　　每只每日喂成石饲料［含正常饲料45.43 g, 致石药物4.57 g（其中酪蛋白1g，蔗糖1.5g， 纤维素1g，猪油1g，胆酸0.02 g， 胆固醇0.05 g）] 50g。喂养60d，后改用正常颗粒饲料喂养30d，并每日喂适量青饲料。 　　3.3 三联消石疗法对照组 　　每只每日喂成石饲料，共60d，后改用正常颗粒饲料加中药（前15d补气养肝汤，后15d疏肝通胆汤，分上下午）灌胃，药物剂量以成人用药剂量（60kg体质量，中药400ml/d）按实验动物体型系数换算法计算，中药1.67ml/d，中药连续给药30d。正常组与模型组均予等体积生理盐水灌胃。各组灌胃时间均为1次/d。从第61 日起，每日用固定器固定豚鼠，针刺一侧“膈俞”、“肝俞”、“阳陵泉”等穴，连接脉冲电针仪通电留针15min，以连续波、频率160 次/ min ，左右交替，每日1 次。同时，第61日起，每隔1日配合应用行推按运经法，在豚鼠最大耐受程度上按照肝内胆管走向推按，每次操作约10分钟。 　　4．标本采集和制备　 　　实验结束后均禁食24 h，眼眶注射空气处死，迅速剖腹取出胆囊，观察有无结石、沉淀及絮状物，低温下切取肝脏组织，予1 %锇酸和2 %戊二醛双固定送检。 　　5．观察指标及方法　 　　5.1 胆汁中C反应蛋白及黏蛋白的含量 　　采用Mgna FTIR-750型红外光谱仪测定豚鼠肝内胆管结石成分。采用磷钨酸沉淀-酚试剂法测定胆汁中黏蛋白的含量。采用胶乳凝集反应法-液体双相试剂法测定胆汁中C反应蛋白的含量。 　　5.2 肝脏超微结构 　　将双固定的肝、胆组织标本用树脂包埋，按电镜常规制备超薄切片，用醋酸铀与柠檬酸铅进行双染色，于日立H26002IV 型电镜观察并照相。 　　结 果 　　1．各组豚鼠肝内胆管成石情况 　　结果见表1。 　　 　　与正常对照组比较，造模组MCP和CRP含量有显著统计学差异（△P lt;0.01）；与造模组比较，三联消石法组MCP和CRP含量差异有统计学意义（*P lt;0.05）。 　　4．各组豚鼠肝脏组织超微结构的变化　 　　4.1 正常对照组 　　肝细胞核圆大，核膜核孔清晰