流式细胞仪在医学实验中的应用研究.docVIP

精品论文 参考文献 流式细胞仪在医学实验中的应用研究 周 媛　（山东省泰安市中医院　山东泰安　271000） 【摘要】 在医学实验中，流式细胞仪起着非常重要的作用，它的操作过程简单快捷、分析准确快速、结果清晰明确，在医学实验中得到广泛的应用，本文结合医学实验的实际情况，对流式细胞仪在医学实验中的应用进行分析与研究。 【关键词】　流式细胞仪　医学实验　应用 1　前言 流式细胞技术起源于20世纪70年代初，在80年代初得到迅速的发展，并且成功制造出性能比较好的流式细胞仪。流式细胞仪的操作过程简单快捷、分析准确快速、结果清晰明确，在医学实验中得到广泛的应用。随着科学技术的不断发展，流式细胞仪在临床医学中将得到更深入、更广泛的应用[1]。 2　流式细胞仪在医学实验中的应用研究 2.1在免疫细胞的分析中的应用#1048577; 流式细胞仪在免疫细胞分析中主要应用于淋巴细胞亚群的测定，淋巴细胞通常可以分为NK 淋巴细胞(CD16+ 56)、B 淋巴细胞(CD19)以及T淋巴细胞(CD3)这三大群体；其中T细胞可以分为T抑制胞/细胞毒细胞(CD8)与辅助细胞/诱导细胞(CD4)。流式细胞仪可以选择系列不相同的抗CD抗原单克隆抗体,并充分结合各种荧光染料进行标记，荧光染料主要包括叶绿素蛋白PerCP、异硫氰酸荧光素FITC、别藻蓝蛋白APC以及藻红蛋白PE等等。流式细胞仪同时可以准确地分辨出各个不同的淋巴细胞亚群,此外还可以对各个淋巴细胞亚群的百分数及其之间的比例进行准确地计算，由此可以显示出患者机体的免疫状态，或者显示出患者机体感染疾病的状态,比如当机体的免疫功能处于亢奋的状态时,CD4+ /CD8+的比值出现显著增高的现象,当出现这种状态时，患者容易出现自身免疫之类的疾病,包括系统性红斑狼疮(SLE)与类风湿性关节炎(RA)等等；当CD4+ /CD8+ 的比值处于显著降低的现象时，患者的机体免疫机能明显地下降,容易引发肿瘤、艾滋病、活动性肝硬化以及病毒感染等等。若患者感染HIV,则其CD4+细胞会遭受大量病毒的破坏,CD4+ /CD8+ 的比值会出现小于1的现象,所以,通过流式细胞仪对CD4+ /CD8+ 的比值及CD4+T 细胞的绝对值进行相关的检测可以及时地掌握患者机体遭受HIV病毒感染的状况[2]。 2.2在细胞周期检测中的应用#1048577; 机体内的细胞,其DNA的含量处于恒定的状态，它可以依据细胞增殖周期(G0 /G1、S、G2 /M )的变化而出现相应的变化。 G0期主要是为静止期, 在G1期，细胞主要实施蛋白质与RNA的合成;在S期(超二倍体)，逐渐合成DNA,在细胞核内，DNA的含量通常处在G1及G2期之中; DNA结束复制过程，增至四倍体,细胞正式迈入G2期;在G2期，蛋白质及RNA处于持续合成的状态，之后开始进入M期。在M期，细胞出现有丝分裂,因此出现两个子细胞,正常情况下，两个子细胞会进入下一个环节的细胞周期中。 2.3在凋亡细胞检测中的应用#1048577; 细胞凋亡主要指在特定的生理环境及病例环境下，细胞依据自身的程序，进行主动的、有序的死亡。细胞凋亡是细胞主动、有序的参与过程，而不是被动、无序的参与过程。细胞凋亡对机体内环境有着非常重要的，它与众多基因的激活、调控以及表达等多种功能有着密切的关系，不仅可以有效地维持机体内环境的稳定性，而且可以减少或者避免无功能细胞及衰老细胞的出现，从而使机体内的细胞更好地适应其内部环境。 流式细胞仪在凋亡细胞检测中的应用主要有以下几点。 2.3.1 Annex in V-FITC /PI检测凋亡#1048577; 正常情况下，细胞膜磷脂的分布处于不均称的状态，在膜内表面出现带负电荷的磷脂，包括磷脂酰丝酸等，在膜外表面，则出现中性磷脂。在早期的细胞凋亡中，磷脂酰丝酸能够从细胞膜的内侧转移到细胞膜的表面，进而出现在细胞外的环境中。对Annex in V 实施荧光素FITC 标记可以有效的检测机体内细胞的早期凋亡现象。在检测过程中，我们还可以实施PI和Annex in V 的联合使用,两者的有机结合能够有效的区分死细胞与凋亡细胞。通过双参数流式细胞仪的散点图,我们可以从左下象限观察到活细胞,即(FITC- /PI-)，而从右上象限我们可以观察到非活细胞，也叫坏死细胞,即(FITC+ /PI+)，而从右下象限我们可以观察到凋亡细胞,即(FITC+ /PI-)。 2.3.2 实施光散射特性检测 细胞在凋亡过程中存在细胞膜皱缩、胞浆浓缩、核解聚、体积减小、凋亡小体形成