硅酸盐细菌菌种NY 882—2004.docVIP

中华人民共和国农业行业标准 ???????????????? NY 882—2004 ??? 硅酸盐细菌菌种 ?Silicate-Dissolving Bacteria Culture 　 ? 　 2005-01-042005-02-01 实施 ?? 中华人民共和国农业部? 发布 　 ?　 　 前??? 言 本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。 本标准起草单位:农业部微生物肥料质量监督检验测试中心。 本标准主要起草人：曹凤明、李俊、沈德龙、姜昕、葛一凡。 硅酸盐细菌菌种 1　范围 本标准规范了农用硅酸盐细菌菌种的特征、要求、检验方法、评价方法以及菌种的纯化、复壮和保藏。 本标准适用于农用微生物菌剂和微生物肥料生产中使用的硅酸盐细菌菌种。 2　规范性引用文件 GB/T 17419-1998????? 含氨基酸叶面肥料 NY/T 301-1995??????? 有机肥料速效钾的测定 NY/T 798-2004??????? 复合微生物肥料 3　术语 Silicate-Dissolving Bacteria Culture 是指一类在土壤中能通过自身的生命活动，分解硅铝酸盐类矿物，释放钾素营养，改善植物的营养条件，并具备生产应用性能的细菌纯培养物。 4　菌种特征 硅酸盐细菌菌种包括胶质芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus）和土壤芽孢杆菌（Bacillus edaphicus）两个种。 4.1　细胞形态 营养体：粗长杆状，两端钝圆，革兰氏染色反应不定，产生聚β-羟基丁酸盐（PHB）颗粒。在培养基?A.1?上(参见附录?A?)菌体大小为（1.0?～?1.2）×?（2.5?～?7.0）μm?，菌体周围有厚荚膜。 芽孢：壁厚，椭圆形，中生或近端生，芽孢囊不膨大或微膨大。 4.2　菌落形态 在?A.1?培养基平板上：菌落圆形，无色，隆起，胶质粘稠，透明或半透明，边缘整齐。 4.3　生物学特征 好氧或兼性厌氧生长，水解淀粉，接触酶反应阳性，氧化酶和卵磷脂酶反应阴性，在无氮培养基（参见附录A.2）上生长良好，生长温度10?℃?～?45?℃。 5　要求 5.1 菌种要求纯培养物，无杂菌。 5.2 硅酸盐细菌菌种技术指标见表1。 表1???? 硅酸盐细菌菌种技术指标 指? 标 解钾能力-速效钾相对增加量，? % ≥ 20 发酵 代谢 产物 植物激素总量，??? mg/L ≥ 1.0 游离氨基酸总量，? mg/L ≥ 50.0 有机酸总量，????? mg/L ≥ 500.0 耐热能力-芽孢存活率，????? % ≥ 70 发酵周期，???????? h ≤ 60 6　检验方法 6.1　菌种纯度检验 在适宜培养基上培养，观察菌落和菌体形态，若有杂菌丢弃或对其进行纯化，纯化方法见 8.1.2? 。 6.2　解钾能力的测定 速效钾相对增加量的测定方法见附录?B。? 6.3　发酵代谢产物测定 6.3.1　发酵条件 在适宜培养条件下，发酵周期结束后取样测定发酵液中代谢产物的含量。以不接种的发酵培养液作对照。发酵培养基见附录?A.3?。 6.3.2　植物激素的测定 见附录?C?。 6.3.3　游离氨基酸的测定 见附录?D?。 6.3.4　有机酸的测定 见附录?E?。 6.4　芽孢存活率测定 6.4.1测定方法 菌悬液在?65?℃?条件下恒温?30?min?杀死营养体?，制成芽孢悬液。芽孢悬液?80?℃?恒温水浴处理?10?min?，将处理前和处理后的芽孢悬液稀释涂布在适宜培养基上，适宜条件下培养?2?d?～?4?d?，计菌落数。三次重复。活菌数测定方法应符合NY/T 798-2004中5.3.2的要求。 6.4.2芽孢存活率计算 按式(1)?计算 ????????????????????? ……(1) 式中: ?-- 芽孢存活率（% ） n0 -- 处理前芽孢悬液的菌落平均数（cfu/mL） n1? -- 处理后芽孢悬液的菌落平均数（cfu/mL） 6.5　发酵周期的检验 适宜生产条件下，当发酵液中的菌体数量达到?108?cfu?/?mL?以上且有?80?%??以上的营养体形成芽孢为发酵周期终止。 7　评价方法 7.1　 7.2　 7.3　 8　菌种纯化、复壮和保藏 8.1　菌种分离与纯化 8.1.1　分离 将土壤或其他样品制成菌悬液，稀释后涂布?A.1?培养基平板上，适宜条件下培养?2?d?～?4?d?，挑取符合硅酸盐细菌菌种特征的菌落进行纯化。 8.1.2　纯化 在适宜的培养基上连续划线培养观察，直至菌落形态一致，镜检菌体大小整齐，无杂菌。 根据硅酸盐细菌的特征进行菌种确认。 8.2　复壮 菌种生长速度下降、菌体形态出现异常、主要功能指标下降时需要进行菌种复壮。 具体操作方法是将菌种