蔡丽希《生物化学》精品课件 生物化学实验指导稿-修改.docVIP

目 录 第一章 生物化学与分子生物学实验基本知识………………………(1) 第一节 生物化学实验室规则…………………………………………………(1) 第二节 实验室安全及防护知识………………………………………………(1) 第三节 实验用器皿的清洗及洗涤液的配制…………………………………(3) 第四节 实验室常用仪器的使用………………………………………………(5) 第二章 常用实验技术介绍 ………………………………………………(8) 第一节 分光光度技术…………………………………………………………(8) 第二节 离心技术…………………………………………………………… (15) 第三节 电泳技术……………………………………………………………（36） 第四节 层析技术…………………………………………………………… (41) 第三章 实验内容 ……………………………………………………… (43) 实验一 可见光分光光度计的使用………………………………………… (43) 实验二 动物肝脏中DNA的提取与测定………………………………… (44) 实验三 胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响……………………… (47) 实验四 DNA的琼脂糖凝胶电泳…………………………………… (52) 实验五 考马斯(Comessie)亮兰结合法测定蛋白质浓度 …………… (54) 实验六 脲酶Km值简易测定………………………………………… (56) 实验七 酮体的生成和利用…………………………………………… (58) 实验八 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳…………………………… (60) 实验九 肝脏组织氨基移换作用(纸层析法) ………………………… (63) 实验十 血清γ-球蛋白的提取与鉴定……………………………… (67) 实验十一 温度、pH值、激活剂、抑制剂对酶活性的影响…………………… (70) 附：实验报告的书写格式……………………………………………………… (74) 第一章 生物化学与分子生物学实验基本知识 第一节 生物化学实验室规则 1、每位同学都应该自觉遵守课堂纪律，维护课堂秩序，不迟到，不早退，不大声谈笑。 2、实验前认真预习实验内容，熟悉本次实验的目的、基本原理、操作步骤和实验技能。该实验与你当前的课堂学习有关吗？是否需要复习或预习这部分内容？ 3、实验时要听从指导老师的指导，记下重点，严格认真地按操作规程进行实验，并注意与同组同学的配合。 4、实验数据和现象应随时记录在专用的实验记录本上。实验结束时，实验记录必须送指导老师审阅后方可离开实验室；实验报告应该在下次实验开始前交给指导老师。 5、精心爱护各种仪器。要随时保持仪器的清洁。如发生故障，应立即停止使用并报告指导老师 6、公用仪器，药品用后放回原处。不得把公用药品占为己用，节约药品，不得浪费。公用试剂瓶的瓶塞要随开随盖，不得混淆。 7、实验完成后应将仪器洗净，置于实验柜中并排列整齐。如有损坏须说明原因，并按规定进行赔偿，及时补充已损坏的玻璃仪器。 8、实验过程中要保持桌面整洁。实验课本放在工作区附近，但不要放在工作区以内。清洁的器具和使用过的要分开放。 9、保持台面、地面、水槽内及室内整洁，含强酸，碱及有毒废液应倒入废液缸。书包及实验不需之物品放在规定处。 10、尽快完成实验报告并按时上交。 11、离开实验室前应该检查水电是否关严，严防发生安全事故。 第二节 实验室安全及防护知识 1．实验室安全知识 在生物化学实验室中，经常与毒性很强、有腐蚀性、易燃烧和具有爆炸性的化学药品直接接触，常常使用易碎的玻璃和瓷质的器皿，以及在水、电等高温电热设备的环境下进行着紧张而细致的工作。因此，必须十分重视安全工作和具备一定的防护知识。 （1）使用电器设备（如烘箱、恒温水浴、离心机、电炉等）时，严防触电，绝不可用湿手或在眼睛旁视时开关电闸和电器开关。凡是未装地线或漏电的仪器，一律不能使用。 （2）使用酒精灯等时，应做到火着人在，人走火灭。 （3）使用浓酸、浓碱，必须极为小心地操作，防止溅失。用移液管吸量这些试剂时，必须使用橡皮球或洗耳球，绝对不能用口直接吸取。如果不慎溅洒在实验桌面或地面上，必须及时用湿抹布或拖布擦洗干净。 （4）使用易燃物（如乙醚、乙醇、丙酮、笨等）时，应特别小心。不要大量放在桌上，更不应在靠近火源处放置。只有在远离火源时，或将火焰熄灭后，才可大量倾倒这类试剂。低沸点的有机溶剂不准在火焰上直接加热，仅限在水浴上利用回流冷凝装置进行加热或蒸馏。如果不慎倾出了相当量的易燃液体。应立即关闭室内所有的火源和电加热器，并打开窗门及通风设备迅速用抹布或毛布擦拭撒出的液体，转入适当的容器中后再作妥善处理。 （5）易燃和易爆物质的残渣（如火柴头等）不得