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第三节 缓冲容量和缓冲范围 结论:缓冲容量与总浓度和缓冲比有关。 ?总浓度的影响: 当缓冲比一定时,c总愈大,缓冲容量β愈大。通常c总在0.05~0.2 mol·L-1之间。 ?缓冲比的影响:当总浓度一定时,缓冲比愈接近1,缓冲容量β愈大。缓冲比等于1时,缓冲容量有最大值 第三节 缓冲容量和缓冲范围 缓冲容量 与pH的关系 (1)HCl+KCl (2)0.1 mol·L-1 HAc+NaOH (3)0.2 mol·L-1 HAc+NaOH (4)0.05 mol·L-1 KH2PO4+NaOH (5)0.05 mol·L-1 H2BO3+NaOH (6)NaOH+KCl 第三节 缓冲容量和缓冲范围 三、缓冲范围 pH=pKa±1变化范围称为有效缓冲范围。 第三节 缓冲容量和缓冲范围 例 将0.20mol·L-1HB溶液和0.20mol·L-1 B-溶液 以9:1,3:1以及1:1 的体积比混合,计算缓冲系的缓冲容量。 解:用相同浓度的共轭碱和共轭酸配制缓冲溶液时,其体积比等于缓冲比,取a V体积HB溶液与b V体积B-溶液混合,则[B-] / [HB] = b / a, c总 = [HB] + [B-] = 0.20 mol·L-1,当a : b = 9 : 1时, 第三节 缓冲容量和缓冲范围 第四节 缓冲溶液的配制 一、缓冲溶液的配制方法 (一)配制原则和步骤 1.选择合适的缓冲系: (1)pH在pKa±1缓冲范围内并尽量接近弱酸pKa。 (2)缓冲系的物质必须对主反应无干扰。 2.所配缓冲溶液的总浓度要适当: 一般总浓度0.05mol·L-1~0.2mol·L-1。 3.计算所需缓冲系的量: 根据Henderson-Hasselbalch方程计算。 4.校正: 需在pH计监控下,对所配缓冲溶液的pH校正。 第一节 缓冲溶液及缓冲机制 (二)常用配制方法 1. 为操作方便,常用相同浓度的共轭酸碱配制缓冲溶液。 2. 可采用过量弱酸(碱)与强碱(酸)反应组成缓冲系,如: HAc (aq, 过量) + NaOH(aq) ═NaAc(aq) + H2O(l) 优点: ? HCl 和 NaOH 溶液为常备试剂,容易获得。 ? 弱酸或弱碱的浓度即缓冲系的总浓度。 ? 通常缓冲溶液的pH需要在pH计监控下调整,滴加强碱/酸易于操作。 第一节 缓冲溶液及缓冲机制 Preparation of PBS (Phosphate Buffer saline) PBS final concentrations are 137mM Sodium, Chloride, 10mM phosphate, 2.7mM Potassium Chloride, pH is 7.4 For 1 liter of Phosphate-buffered saline (PBS buffer) use: - Dissolve in 800 ml of distilled H2O: - 8 g of NaCl - 0.2 g of KCl - 1.44 g of Na2HPO4 and - 0.24 g of KH2PO4. - Adjust the pH to 7.4 with HCl or NaOH. - Add H2O to 1 liter Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0) Tris(hydroxymethyl)aminomethane 组份浓度:1 M Tris-HCl 配制量:1 L 配制方法: 1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。 2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。 3. 加入浓盐酸调节所需要的pH值。 4. 将溶液定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后,室温保存。 注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。 第四节 缓冲溶液的配制 例 如何配制pH=4.50的缓冲溶液1000mL? 解 (1) 选择缓冲系 由于HAc的pKa= 4.756,接近所配缓冲溶液 pH=4.50,所以可选用HAc-Ac-缓冲系。 (2)?确定总浓度,计算所需缓冲系的量 一般要求具备中等缓冲能力即可,并考虑计算 方便,选用0.10mol·L-1的HAc和0.10mol·L-1 NaAc溶液。应用式(4.5)可得 第四节 缓冲溶液的配制 设 V(NaAc) = x mL 则 : V
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