沉默TRPM7对dHL-60细胞极性化的影响及其机制.DOCVIP

TRPM7对dHL-60细胞极性化的影响 吴娴波，邹文英，蔡春青，陈新宏，邹飞，孟晓静 南方医科大学公共卫生与热带医学学院， 广东 广州 510515 摘要： 目的 探讨TRPM7对dHL-60细胞极性化的影响及可能的分子机制。方法 通过siRNA技术下调dHL-60细胞TRPM7蛋白表达，用zigmond小室观察细胞极性化的变化，并采用Western blotting方法检测TRPM7和磷酸化AKT的表达水平。结果 转染TRPM7靶向siRNA的dHL-60细胞中，TRPM7蛋白表达水平明显降低（P0.05）；干扰TRPM7后dHL-60细胞的极性化率显著增加；磷酸化AKT表达明显上调，而总AKT的表达则无明显变化。结论 TRPM7通过AKT信号通路调控细胞极性相关分子，进而影响dHL-60细胞的极性化能力。 关键词： TRPM7；dHL-60细胞；极性化；AKT Effects of TRPM7 gene silencing on differentiated HL-60 cell polarization WU Xianbo, ZOU Wenying, CAI Chunqing, CHEN Xinhong, ZOU Fei, MENG Xiaojing School of Public Health and Tropical Medicine, Guangzhou510515, China Abstract: Objective To determine the effect of TRPM7 gene silencing on differentiated HL-60 (dHL-60) cell polarization and its possible molecular mechanism. Methods Cell polarization was observed in dHL-60 cell transfected with a small interfering RNA (siRNA) targeting TRPM7. Western blotting was used to examine the expressions of TRPM7 and phosphorylated AKT in the transfected cells. Results Transfection of dHL-60 cells with TRPM7-specific siRNA significantly decreased the proteins levels of TRPM7, increased cell polarization and the expression of phosphorylated AKT(P0.05). However, the expression of AKT was not affected. Conclusion TRPM7 regulates the dHL-60 cell polarization probably by AKT pathway. Key words: TRPM7; dHL-60 cell; polarization; AKT 收稿日期： 基金项目： 国家自然科学基金 Supported by National Natural Science Foundation of China . 作者简介：吴娴波，博士，副教授，E-mail: tropmed@163.com 通信作者： 孟晓静， 博士，教授， E-mail: xiaojing-meng@163.com 中性粒细胞]。在细胞建立极性化过程中，其中的信号分子的调控失败会导致中性粒细胞的异常激活，从而导致机体多种疾病病理如败血症、哮喘、缺血/再灌注损伤的发生。中性粒细胞的极化4, 5]，作为非兴奋性细胞，瞬时电位通道(transient receptor potential，TRP)作为受体操纵性通道是介导钙离子内流的重要通道。瞬时电位M7(transient receptor potential melastatin 7，TRPM7)是TRP的重要成员，参与6, 7]，但TRPM7中性粒细胞为外周分化的终末血液细胞，进行基因操作differentiated HL-60, dHL-60）细胞为受试细胞，通过siRNA干扰下调其内源性TRPM7基因的转录和蛋白表达，探讨对dHL-60细胞极性化作用的影响，为进一步研究TRPM7基因功能及中性粒细胞极性化的机制提供新的研究依据。 材料和方法 材料