毛细管电泳用于评价脱氧核糖核酸退火反应.PDFVIP

( ) 第 31 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究报告 第 1 期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2003 年 1 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 10～13 毛细管电泳用于评价脱氧核糖核酸退火反应 何新亚　周小棉　林炳承 ( 中国科学院大连化学物理研究所 , 大连 116023) ( ) 摘 　要 　将毛细管电泳技术用于定性和定量评价互补单链脱氧核糖核酸 DNA 的退火反应 ,从电泳信号能直 接观察退火效率。解释了双链 DNA 的电泳迁移特性 ,对 DNA 产品基质中的 NaCl 浓度进行了测定 ,考察了 DNA 样品中NaCl 浓度对进样的稀释效应。在所应用的实验条件下 ,NaCl 浓度在 20 mmolL 以内稀释效应的影 响是可以忽略的。 关键词 　毛细管电泳 ,脱氧核糖核酸 , 退火 1 　引　　言 毛细管电泳(CE) 以其高效、快速、微量及便于自动化等特点, 已广泛用于生物分子的分离和测 1 ( ) 定 。脱氧核糖核酸 DNA 分子便是 CE 在生物分子领域的应用重点之一 ,CE 测定 DNA 已用于分子生 2 ( ) 物学的基因分析 。在DNA 合成中 ,一般采用平板电泳及高效液相色谱 HPLC 来评价产品 ,但这两种 ( ) ( ) 方法耗时比较长 ,并且因为染色甚至放射性标记 平板电泳法 、样品需求量大 HPLC 法 等因素给分析 ( ) 3 ,4 者带来不便。已有报道采用 CE 方法对聚合酶链反应 PCR 产物的分析 ,这些工作基本上是定量考 察 PCR 的放大效果。脱盐是DNA 合成与制备的重要环节 ,大多数实验室利用现成的 Kit 进行脱盐操 作 ,虽然总体上可以保证充分地除去盐份 ,但是一般没有详细测定剩余的盐浓度 ,在某些情况下 ,譬如利 用 ESI 质谱法测定 DNA5 ,即使微量的盐存在也严重干扰实验结果。而利用毛细管电泳能很好地满足 ( ) 微量 DNA 产品中强电解质 主要是NaCl 的测定。本工作通过 CE 对 DNA 的退火反应进行系统地考察 , 试图建立一种用于 DNA 产品的定量、定性检测 ,评价退火效率、脱盐效果以及基质盐效应的快速、简便、 实用的方法。 2 　实验部分 2. 1 　仪器与试剂 ( ) Beckman PACE MDQ 毛细管电泳仪 美国 Beckman 公司 ,二极管阵列检测器。两条序列互补的单 ( ) ( ) ( ) 链 DNA ssDNA ,序列为 :5′CCCCTATACCGC3′简称为 dC