伪狂犬病病毒Ra株体外感染ST细胞超微结构的研究.pdfVIP

·34· 生物技术 中国畜牧兽医 2013年第40卷第11期 伪狂犬病病毒Ra株体外感染ST细胞超微结构的研究 郭剑英1。张晓战1，黄红亮2，许冬蕾1，刘碧涛1，任常宝2。邵定勇2，唐兆新1·2 (1．华南农业大学兽医学院，广东广州510642；2．肇庆大华农生物药品有限公司，广东肇庆526238) 摘要：本研究以伪狂犬病病毒(pseudorabies 殖规律和致细胞病变的显微结构进行观察。结果显示，PRV能诱导ST细胞发生明显病变，细胞的病变程度与PRV感染时 间密切相关。PRV Ra株感染sT细胞，病毒吸附于ST细胞表面，以膜融合内陷的方式进入细胞和细胞核内，在细胞核内复 制，出现包涵体结构，以出芽方式离开细胞核，在高尔基体等细胞内膜结构处完成病毒粒子的囊膜化过程。感染前期，病毒通 过膜融合方式被释放到细胞外，完成细胞间病毒的传播；感染后期，细胞溶解，大量释放病毒粒子。感染细胞超微结构的变化 主要体现为：线粒体肿胀、数目减少，嵴面积减少，核内出现包涵体，细胞融合，细胞内空泡化严重，溶细胞现象。 关键词：伪狂犬病病毒Ra株；ST细胞；细胞病变效应；超微结构 中图分类号：$852．65 文献标识码：A 文章编号：1671—7236(2013)11-0034—04 伪狂犬病病毒(pseudorabiesvirus，PRV)是一 Ra 染过程中细胞超微结构的变化，本研究以PRV 类引起多种家畜和野生动物以发热、奇痒(猪除外) 株体外感染ST细胞为模型，观察病毒的复制过程 和脑脊髓炎为主要症状的一种急性、进行性传染病 及细胞内超微结构的变化规律，从细胞水平上了解 病原。伪狂犬病对猪的危害尤为严重，猪是PRV PRV的增殖和致病过程，为下一步致病机理的研究 增殖感染唯一可存活的宿主，是PRV的自然贮存 奠定理论基础。 库和传染源(Pomeranz等，2005)。流行病学调查结 1材料与方法 果显示中国猪场伪狂犬病的感染率很高，自1947年1．1材料PRV Ra株和ST细胞均由肇庆大华农 刘永纯首次报道国内猫体内分离出PRV病原以 生物药品有限公司重点实验室提供；DMEM培养 来，已有31个省市先后报道该病，该病已成为危害 基、胰酶和胎牛血清均购自Gibco公司；电镜样品制 中国养猪业最为严重的猪病之一(李东卫，2012；白备所用试剂由中山大学医学院电镜室提供。 挨泉等，2005)。 1．2细胞培养与病毒增殖ST细胞用生长液(含 病毒作为细胞内专性寄生的微生物，在细胞内 的生活周期包括吸附、穿入、脱壳、复制、包装和释放 培养箱中培养。待细胞长成单层时，接种PRV，37℃ 6个阶段，PRV作为细胞内感染的病毒入侵宿主细吸附1h，加入维持液(有2％胎牛血清的DMEM培 胞后，需借助于宿主细胞的转录翻译系统进行DNA 养基)继续培养。显微观察并记录细胞病变(CPE)， 的复制和病毒粒子的装配等活动，会对宿主细胞的 CPE达80％时收获病毒，反复冻融3次，使细胞完 细胞活性和超微结构造成很大影响(Marcaccini等， 全脱落，离心收集上清。分装，于一80℃保存备用。 2007)。病毒感染初期，病毒的细胞内复制增殖还需1．3 TCID。。的测定将生长良好的细胞消化，制 一定的时间，对细胞活性和超微结构的影响不明显； 成适当浓度的细胞悬液，以100弘L／：fL接种于96孔 感染后期病毒的出芽及溶细胞作用等能明显引起细 细胞培养板，将病毒作10倍系列稀释至1：109，每 胞形态的改变(Card等，1993)。为了解在PRV感 个稀释度100肚L／孔，且设8个重复，