利用唐鱼雌激素受体构建环境雌激素重组酵母测评系统 - 环境科学学报.pdfVIP

第 ３５ 卷第 １期 环　 境　 科　 学　 学　 报 Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．１ ２０１５年１月 　Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ Ｊａｎ．，２０１５ ＤＯＩ：１０．１３６７１／ｊ．ｈｊｋｘｘｂ．２０１４．０７３１ 陈美玲，刘琳，杨志兵，等．２０１５．利用唐鱼雌激素受体构建环境雌激素重组酵母测评系统的研究［Ｊ］．环境科学学报，３５（１）：３１７⁃３２３ Ｃｈｅｎ Ｍ Ｌ，Ｌｉｕ Ｌ，Ｙａｎｇ Ｚ Ｂ，ｅｔ ａｌ． ２０１５．Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｙｅａｓｔ ａｓｓａｙ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｅｓｔｒｏｇｅｎｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｒｏｍ Ｔａｎｉｃｈｔｈｙｓ ａｌｂｏｎｕｂｅｓ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ，３５（１）：３１７⁃３２３ 利用唐鱼雌激素受体构建环境雌激素重组酵母测评 系统的研究 １ １ ２ ３ １ １ １ １ １，４，∗ 陈美玲 ，刘琳 ，杨志兵 ，武佳韵 ，黄儒强 ，李赞 ，凌源智 ，曾健辉 ，马广智 １． 华南师范大学生命科学学院，广州５１０６３１ ２． 厦门大学生命科学学院，厦门３６１１０２ ３． 四川大学生命科学学院，成都６１００６４ ４． 广东科学技术职业学院，珠海５１９０９０ 收稿日期：２０１４⁃０３⁃１０　 　 　 修回日期：２０１４⁃０５⁃０６　 　 　 录用日期：２０１４⁃０５⁃０７ 摘要：利用唐鱼雌激素受体基因片段构建重组酵母，用以筛选环境雌激素类化学物质．实验先将唐鱼雌激素受体 ｔｅｒα 基因片段插入载体 ｐＧＡＤＴ７ 中构建表达质粒ｐＧＡＤＴ７／ ＴＥＲα，同时将雌激素效应元件（ｅｒｅ）片段插入ｐＭＰ２０６载体中构建报告质粒ｐＭＰ２０６／ ＥＲＥ⁃ＬａｃＺ；然后把表达 质粒和报告质粒共转化到酵母ＡＨ１０９ 中，经筛选成功构建了由唐鱼雌激素受体调控的表达ｌａｃＺ基因的重组酵母ＡＨｐＴＥＲα／ ＥＲＥ．结果表明，所 构建的重组酵母ＡＨｐＴＥＲα／ ＥＲＥ在不同浓度 １７β⁃雌二醇（Ｅ ）的诱导下，β⁃半乳糖苷酶的活性呈现出明显的剂量⁃效应关系，其ＥＣ 为（０５２１± ２ ５０ －１ ０．７００） ｎｍｏｌ·Ｌ ．与ＤＭＳＯ对照组相比，重组酵母在 １７β⁃雌二醇诱导下有明显的β⁃半乳糖苷酶活性增强的现象．在不同浓度 １７α⁃乙炔基雌二醇 （ＥＥ ）、壬基酚（ＮＰ）及其混合物、双酚Ａ（ＢＰＡ）、１７β⁃雌二醇（Ｅ ）（阳性对照）的诱导下，重组酵母均呈现出剂量⁃效应关系，且灵敏度大小为 ２ ２ Ｅ ＞ＥＥ ＞ＮＰ＞ＢＰＡ．结果表明，本研究成功构建了重组基因酵母测评系统，初步判定该重组酵母可应用于环境雌激素的筛选． ２ ２ 关键词：唐鱼；环境雌激素；重组酵母评测系统；雌激素受体；β⁃半乳糖苷酶 文章编号：０２５３⁃２４６８（２０１５）０１⁃３１７⁃０７　 　 　 中图分类号：Ｘ１７１．５　 　 　 文献标识码：Ａ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｙｅａｓｔ ａｓｓａｙ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｅｓｔｒｏｇｅｎｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｒｏｍ Ｔａｎｉｃｈｔｈｙｓ ａｌｂｏｎｕｂｅｓ １ １ ２ ３