多重聚合酶链反应在α-地中海贫血诊断中的价值分析.docVIP

精品论文 参考文献 多重聚合酶链反应在α-地中海贫血诊断中的价值分析 内江市第一人民医院 四川内江 641000 摘要：目的：探讨单管多重PCR对缺失型alpha;-地中海贫血（alpha;-地贫）的诊断效能。方法：使用单管多重PCR基因诊断试剂对375例血液学方法筛检疑似alpha;-地贫患者进行基因检测，并对其中部分标本进行测序。结果：疑似为alpha;-地贫的375份临床标本，基因检测证实其中267例为alpha;-地贫，其结果经序列分析证实。与PCR检测相比，一管法RBC脆性、MCV、MCH与RDW-CV检测的灵敏度分别为80.1%、81.6%、79.0%、78.3%，特异性分别为78.7%、90.7%、66.7%、77.8%。结论：与血液学方法相比，多重PCR检测具有快速、准确的优点，可用于人群和临床样品的缺失型alpha;-地贫的分子筛查以及产前诊断。 关键词：alpha;-地贫；多重聚合酶；应用价值 alpha;-地贫是指因alpha;珠蛋白链基因缺失或功能缺陷引起的alpha;链合成受到抑制，发生减少或缺乏的一组血红蛋白疾病，是一种较为常见的单基因遗传疾病，在我国南方地区，尤其是广西、广东两省较为多见，其发病率可达14.95%及8.53%。聚合酶链反应（PCR）及基于PCR方法的各种分子生物学技术是alpha;-地贫基因诊断的常用方法，本组研究中，通过采用PCR检测alpha;-地贫，观察其在alpha;-地贫诊断中的应用价值，旨在为临床提供参考，现报告如下。 1 资料与方法 1.1一般资料 选择我院自2012年2月至2015年2月收治的375例疑似alpha;-地贫患者的临床资料，患者中男性192例，女性183例；患者年龄25~45岁，平均年龄（32.7plusmn;7.8）岁。 1.2方法 全部患者均采用单管多重PCR检测，仪器采用美国ABI公司生产的9700型PCR扩增仪，现场采用真空采血管抽取2ml静脉血，进行血细胞分析，置放于20℃室温下保存，基因检测前放置于-18℃下保存。 测定时取EDTA抗凝静脉血，采用Sysmex DX21自动血细胞分析仪检测平均红细胞体积（MCV）、平均血红蛋白浓度（MCH）等参数，测定HbA2。采用中山大学遗传教研室的红细胞脆性一客定量法试剂检测红细胞脆性。取2ml静脉EDTA抗凝血，收集白细胞。提取基因组DNA，Gentran??司生产，TE溶液溶角，-70℃保存。PCR扩增采用深圳益生堂生物企业公司生产的alpha;-地贫基因诊断试剂盒进行检测，按试剂盒操作进行。25mu;l反应总体积中含基因组DNA0.1mu;g~1mu;g2.5U TaqDNA聚合酶。95℃变性5min，97℃变性45s，61℃退火1min15s，72℃延伸2min30s，35循环，最终72℃延伸5min。取10mu;lPCR产物，放于2mu;l电泳加样缓冲液，混匀，将1.0%琼脂糖凝胶加入加样孔。稳压电泳1h。置于UVP或VU灯下观察。血红蛋白电泳采用美国海伦娜公司全自动电泳仪及其试剂进行。 1.3疗效判定标准 alpha;-地贫：MCVlt;80fl，MCHlt;26pg，HbA2lt;2.5，一管法红细胞脆性（RBC）脆性lt;60%。 2.结果 观察发现，PCR诊断alpha;-地贫267例，108例为非地中海贫血者，其结果经分析证实。一管法RBC脆性检测，阳性214例，阴性85例；MCV检测阳性218例，阴性106例；MCH阳性211例，阴性98例；HbA2阳性209例，阴性89例。与PCR检测比较，一管法RBC脆性检测、MCV、MCH与HbA2灵敏度分别为80.1%、81.6%、79.0%、78.3%，特异性分别为78.7%、90.7%、66.7%、77.8%。 3.讨论 alpha;-地贫是一种染色体隐形遗传性溶血性血液疾病，也是较为常见的单基因遗传病之一。数据显示[1]，alpha;-地贫在热带与亚热带地区具有较高的发病率，我国南方地区，尤其是广东与广西两省，alpha;-地贫携带率较高，可达8.53%和14.95%。 多数alpha;-地贫患者表现为同一染色体上两个相邻的alpha;-基因中的一个或两个缺失，即缺失型alpha;-地贫，缺失2个alpha;基因为alpha;-地贫1，即alpha;0-地贫，我国患者多为东南亚缺失型，即--SEA，缺乏1个alpha;基因为alpha;-地贫2，即alpha;+-地贫，我国以-alpha;3.7（右侧缺失型，即右缺）及-alpha;4.2（左侧缺失型，即左缺）最为常见。 目前