药物分析（湖南大学） 第06章 芳酸类药物的分析.ppt

四、紫外分光光度法 直接分光光度法 贝诺酯的取代苯结构在乙醇溶液中，在240nm处有最大吸收，可用于含量测定。 离子交换-紫外分光光度法 氯贝丁酯在226nm处有最大吸收，但对-氯酚等亦有吸收，干扰测定。 氯贝丁酯不发生电离，而对-氯酚等可发生酸性解离，采用阴离子交换色谱分离后，再用紫外-可见分光光度法测定。 柱分配色谱—紫外分光光度法 经柱色谱分离后，可同时定量测定阿司匹林胶囊中阿司匹林和水杨酸的含量 水杨酸的限量测定 固定相： 洗脱液：冰醋酸-水饱和乙醚溶液(1→10)； 测定波长：306nm 上层为硅藻土3g和新制FeCl3-尿素试剂2ml的混合物；下层为硅藻土1g和磷酸液（5mol/L）0.5ml的混合物。 注： 水杨酸与三氯化铁-尿素生成紫色配位化合物，保留于硅藻土色谱柱上; 用三氯甲烷洗脱时，高浓度的尿素使配位化合物移动较慢; 以冰醋酸的乙醚溶液洗脱时，紫色配合物解离，水杨酸游离出来，继而被三氯甲烷洗脱。 注： 在硅藻土-NaHCO3色谱柱中，阿司匹林及水杨酸成钠盐保留在柱上，先用三氯甲烷洗脱除去中性或碱性杂质。 再用醋酸酸化，使阿司匹林游离，继而被三氯甲烷洗脱。 阿司匹林含量测定 固定相： 洗脱液：冰醋酸三氯甲烷(1→10) 测定波长：280nm 硅藻土3g和新制NaHCO3(1→10)试剂2ml的混合物； 离子对HPLC法（内标法） 色谱条件 填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶 流动相： 磷酸二氢钠液(0.05mol/L)-磷酸氢二钠(0.05mol/L)-甲醇(含氢氧化四丁基铵1.9g)(425:425:150) 内标：磺胺溶液（5μg/ml）,用流动相配制。 流速：1.5ml/min 检测波长：254nm 进样量：20μl 离子对试剂和其他添加剂选用规则 样品中含有-COOH、-SO3H基团时，选用的离子对试剂应是带正电荷的有机胺盐，流动相通常使用甲醇-水； 除离子对试剂外，一般还需加入磷酸盐缓冲液，以控制流动相的酸度。从而使这些酸性官能团获得解离； 样品中含有-NH2、-NH-基团时，选用的离子对试剂应是烷基磺酸盐或硫酸盐； 样品中同时含有-NH2、-COOH，-SO3H等不同性质的基团时，则规则①、②或③选用的离子对试剂和添加剂均为合理。 三、二氟尼柳中有关物质的检查 二氟尼柳存在多条合成路线，产品中可能存在多种苯或联苯类合成中间体及副产物，结构和性质相差较大； 使用单一的正相或反相色谱法难以检出有关物质； 《中国药典》（2005）分别采用TLC（正相）和反相HPLC，以自身对照法检查有关物质A和B。 有关物质A的检查（自身高低浓度对比法 ）： 吸取5μl点样 精密量取适量 加甲醇稀释成浓度为50μg/ml 配制本品的甲醇溶液 浓度约为10mg/ml 对照液 吸取5μl点样 同一硅胶CF254薄层板 以正己烷-二氧六环-冰醋酸（85:10:5）为展开剂，展开后，晾干，置于紫外灯(254nm)下检查 供试品 对照品 判断: 控制杂质斑点个数，控制杂质种类； 供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液的主斑点（或荧光强度）。 优点： 以供试品的稀溶液作为对照液，不需要杂质对照品，简单、价廉，还可配成几种限量的对照溶液； 缺点： 不同物质，不同Rf值比较，准确度较差、直观性较差。 杂质对照品法 判断： 供试品中所含杂质斑点不得超过相应的杂质对照斑点。 优点： 同一物质，同一Rf值比较，准确度高、直观性强。 缺点： 需要杂质对照品。 供试品 对照品 有关物质B的检查 取有关物质A项下的供试品与对照液，照HPLC法测定。 填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶 流动相：水-甲醇-乙腈-冰醋酸(55:23:30:2) 检测波长：254nm 进样量：供试品和对照品各20μl 判断： 供试品溶液的色谱图中的各杂质峰面积的和不得大于对照品溶液的主峰面积。 四、甲芬那酸中特殊杂质的检查 合成工艺 （邻氯苯甲酸） CH3 NH2 H3C COOH Cl Cu COOH NH CH3 CH3 + （2,3-二甲苯胺） （甲芬那酸） 检查 《中国药典》（2005）规定检查“铜”和“有关物质”。 “铜”检查法 采用原子吸收分光光度法测定，铜含量的限度：0.001%。 供试品： 加硫酸湿润 炽灼至灰化完全 取本品1.0g 置于石英坩埚 加0.1mol/L硝酸溶液溶解，定量转移至25ml容量瓶中，摇匀，即得 加0.1mol/L硝酸溶液稀释至刻度，摇匀即得 精密称取硫酸铜0.393g 置于1000ml量瓶中 加0.1mol/L硝酸溶液溶解 并稀释至刻度，摇匀 标准铜溶液： 精密称取标准铜溶液1.0ml，置于25ml量瓶中 精密量取10ml置于10