微生物发酵法生产松仁多肽的研究 Study on Production of Pine Polypeptide by Microbe Fermentation Method.pdfVIP

第9卷第4期 中国食品学报 Vol-9No．4 2009年8月 ofChineBeInstituteof‰dscience蛐d 009 Joumal Technology Aug．2 微生物发酵法生产松仁多肽的研究 张 智 朱宏亮 黄 放 王婷婷 (东北林业大学林学院哈尔滨150040) 摘要通过单因素试验和响应面综合试验．确定枯草芽孢杆茵(砒刎琳s曲￡池)ls-02发酵生产松仁多肤的 最佳发酵条件，即：接种量1％，40目松仁蛋白粉，底物含量10％，初始pH6．7。装液量100m协00mL三角瓶，培 养温度34．1℃，搅拌转速110r，min。发酵时间48．6h，在此条件下肽的最大得率为73．6％。对所得松仁肽进行初 步的分离纯化，经截留分子质量10kDa的中空纤维柱超滤。得分子质量10kDa左右的超滤液，其回收率为 89．7％。超滤液经SephadexG一25柱分离纯化及相对分子质量分布的测定，共洗脱出4个峰，其各级分的分子质 Ooo 量分别为5 Da以上、l819、575和239Da。 关键词枯草芽孢杆茵响应面松仁肽分离纯化 文誊编号 1009—7848(2009)04—0088-08 生物活性肽是由20种编码氨基酸以不同组 酵制取松仁肽。将大分子松仁蛋白分解成小分子 成和排列方式构成的不同肽类的总称。活性肽具 肽，并对其进行了分离纯化。 有多种人体代谢和生理调节功能。如促进免疫、调 节激素、降血压、降血脂、抗氧化等作用，是当前国 1 材料 际药学和食品界热门的物质和极具发展前景的功 1．1 菌种 能性因子【阐。人们从动物活性成分中发现了许多 枯草芽孢杆菌(配以觚su坛班)ls_02，东 具有较强生物活性的多肽．有些活性多肽已成为 北林业大学食品微生物实验室保藏。 疗效显著的临床药物，如胰岛素、脑活素等旧。然而 1．2斜面培养基 对植物中存在的天然活性肽的研究却较少。 斜面培养基(％)：葡萄糖2，蛋白胨2，酵母 松仁中不仅含有丰富的油脂。还含有营养价 浸膏1，琼脂2，pH6．0。 值很高的蛋白质，其含量在13％～20％之间。所含1．3种子培养基 氨基酸种类较为齐全，尤其是人体必需氨基酸含 种子培养基(％)：葡萄糖0．5，酵母膏1，蛋白 量较普通植物的高川。但松仁蛋白质的分子结构复 胨0．5，氯化钠0．2，自然pH值。 杂，相对分子质量大，直接食用后松仁蛋白的消化 1．4摇瓶发酵培养基 率和生物效价远达不到预期的目标。松仁多肽能 摇瓶发酵培养基：松仁蛋白溶液。 克服松仁蛋白在营养方面的弱点．提供极易消化 1．5主要原料与试剂 吸收的多肽化合物。 微生物发酵法生产肽。是利用微生物生长代 司生产；琼脂，西班牙生产；抑肽酶、维生素B。：、氧 谢所产的胞外蛋白酶分解蛋白。微生物的酶系较 化型谷胱甘肽和L一色氨酸，Si舯a公司生产；三氯 为复杂，内切酶将大分子蛋白切成小肽的同时。修 乙酸、98％硫酸、甲醛，上海润捷化学试剂有限公 饰酶对暴露出的疏水键苦味基团进行修饰，使得 司；蛋白胨、酵母膏、葡萄糖，北京华美生科生物技 新产生的小肽分子口味相对柔和。该法生产的肽 术有限公司：其它药品均为国产分析纯级。 具有成本低、无苦味等优点阁。本文采用微生物发 1．6仪器与设备 756PC紫外分光光度计，上海光谱仪器有限 收稿日期：2008-08—28