ecadherin与cd133在大肠癌及其癌前病变组织中的表达及意义.docVIP

精品论文 参考文献 Ecadherin与CD133在大肠癌及其癌前病变组织中的表达及意义 （辽宁省肿瘤医院肿瘤内科，辽宁 沈阳 110042） 中图分类号 R735.34 文献标志码 A 文章编号 1008-0408（2015）2-0012-02 摘 要 目的：研究细胞周期的信号调控机制的意义。方法：本人收集辽宁省肿瘤医院手术切除并经病理学检查证实的大肠癌标本及其配对正常大肠黏膜，构建完成大肠癌及其癌前病变的组织微阵列石蜡块，进行免疫组化分析。结果:大肠癌组织中Ecadherin蛋白表达均与患者年龄、性别、大肠癌Borrmann分型、组织学类型、Lauren分型及侵袭深度无关,Pgt;0.05，但两者表达与大肠癌淋巴结转移密切相关，即有淋巴结转移组Ecadherin及阳性表达率显著高于无淋巴结转移组，Plt;0.05。在大肠癌组织中Ecadherin蛋白表达表达呈正相关，有统计学意义（rk=0.288，P=0.013）。结论：Ecadherin蛋白可以作为大肠癌诊断和预后判断的分子标志物，CD133不仅参与了大肠黏膜癌变的起始阶段,同时也参与了癌变的全部进程, CD133有望作为一个有临床应用价值的大肠癌早诊和大肠黏膜癌变预警的蛋白标志物。 关键词 大肠癌；STAT3；Ecadherin；CD133；免疫组织化学 大肠癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，长期以来我国一直是大肠癌高发区，因此大肠癌的治疗研究仍是我国医务人员工作、研究的重点。迄今关于大肠癌发病机制及治疗研究仍没有重大突破，尚不能满足临床对大肠癌进行有效控制的需要。在正常情况下，大肠黏膜上皮细胞增殖和凋亡间保持动态平衡，这是其结构完整和功能健全的基础。这种平衡有赖于癌基因、抑癌基因，以及某些调节肽等的调控，一旦失控，癌基因被激活而抑癌基因被抑制，促使增殖加快，DNA损伤增加但得不到修复，产生非整倍体，而凋亡机制不能相应启动，使细胞获永生，渐进性细胞周期调控机制的破坏则最终进展到癌。因此，深入研究细胞周期的信号调控机制具有重要意义。 1 材料与方法 本人收集辽宁省肿瘤医院手术切除并经病理学检查证实的大肠癌标本及其配对正常大肠黏膜各91例，肠上皮化生35例，异型增生7例。91例大肠癌患者中男56例，女35例；年龄26～81岁，中位年龄60岁；大肠癌大体Borrmann分型：Ⅱ型6例，Ⅲ型78例，Ⅳ型7例；WHO病理组织学分型：乳头状腺癌2例，高分化管状腺癌8例，中分化管状腺癌27例，低分化腺癌32例，黏液腺癌14例，印戒细胞癌4例，未分化癌4例。所有标本均经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，制成4mu;m厚切片备用。所有患者术前均未接受放、化疗。 大肠癌组织芯片制作：采用组织芯片制作仪(Microarrayer,Beecher Instruments,USA)制作组织芯片。构建完成大肠癌及其癌前病变的组织微阵列石蜡块1、2、3和4（蜡块1：含115个组织芯；蜡块2：含107个组织芯；蜡块3：含108个组织芯；蜡块4：含121个组织芯）。将组织芯片蜡块行连续切片，切片厚度为4mu;m，用于免疫组织化学染色的切片裱于经0.1%多聚赖氨酸防脱片处理的载玻片上，60deg;C烤片1小时，58deg;C中继续烤片18小时，常温保存备用。 免疫组化染色检测STAT3、Ecadherin和CD133蛋白表达：采用Envision方法对大肠癌及其癌前病变组织芯片进行免疫组化染色。兔抗人STAT3单克隆抗体（工作浓度1：120）和Ecadherin单克隆抗体（工作浓度1：100）分别为美国CST和SAB公司产品；兔抗人CD133多克隆抗体购自福州迈新公司。PV-9000 通用型二步法免疫组化检测试剂盒和DAB显色试剂盒均购于北京中杉金桥生物有限公司。所有操作步骤依据产品说明书进行，每组试验均以PBS 代替一抗作为阴性对照。 结果判定：免疫组化染色以细胞浆和/或细胞核中出现清晰棕黄色颗粒为阳性细胞。每一病例选择2个有代表性的高倍镜视野，计数200个细胞，阳性细胞占计数同类细胞百分率le;5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，ge;76%为4分。染色强度以阳性细胞呈色反应为准：无特异着色为0分，浅黄色为1 分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；然后按染色强度和阳性细胞所占的百分比的乘积将结果分为：0分为阴性（－）；1～4分为弱阳性（+）；5～8分为中度阳性（++），9～12分为强阳性（+++）。 统计学分析：采用SPSS 11.5统计学软件处理，STAT3、Ecadherin及CD133蛋白在正常大肠黏膜