华蟾素抑制tgf-β1诱导的人结肠癌sw480细胞上皮-间质化的实验研究huachan inhibition of tgf - beta 1 human sw480 colon cancer cells induced by epithelial - between qualitative experiment research.pdfVIP

目录 中文摘要 1 英文摘要 3 英语缩略词表 .6 引言 7 材料与方法 10 实验结果27 讨论 37 结论40 参考文献41 综述44 致谢50 万方数据 华蟾素抑制TGF-β1诱导的人结肠癌SW480 细胞上皮- 间质化的实验研究 中文摘要 目 的： 1、研究中成药华蟾素注射液是否能够影响TGF-β1诱导的人结肠癌SW480 细胞 的上皮- 间质化过程。 2 、研究华蟾素对TGF-β1诱导的人结肠癌SW480 细胞增殖、侵袭与迁移能力的 影响。 方 法： 1、将体外培养的人结肠癌 SW480 细胞分为：空白对照组；TGF-β1 单独诱 导组，TGF-β1 剂量为10ng/ml ；不同剂量华蟾素干预组（分别选择2.5 、5、10、 20 、40 、80mg/ml 剂量华蟾素与TGF-β1共培养），且TGF-β1剂量均为10ng/ml。 体外培养48 小时。 2 、利用倒置相差显微镜观察各组细胞形态学变化。 3、CCK8 检测各组细胞增殖情况。 4 、Transwell 小室实验检测空白对照组、TGF-β1单独诱导组和2.5 、5mg/ml 剂量 华蟾素干预组的细胞侵袭与迁移能力变化。 5、QRT-PCR 和Western blot 分别检测空白对照组、TGF-β1单独诱导组和2.5 、 5mg/ml 剂量华蟾素干预组细胞E-钙粘蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin） 的mRNA 及蛋白水平。 结 果： 1、倒置相差显微镜观察结果表明，与空白对照组相比，TGF-β1 单独诱导组、 2.5mg/ml 剂量华蟾素干预组 SW480 细胞呈现典型的间质化表型，5、10、20 、 40 、80mg/ml 剂量华蟾素干预组细胞均显示出典型的上皮表型。 2 、CCK8 结果显示，与空白对照组相比，TGF-β1 单独诱导组SW480 细胞增殖 活力未发生明显变化 （P0.05)，与TGF-β1单独诱导组比较，2.5 、5mg/ml 剂量 华蟾素干预组细胞增殖活力未发生明显变化 （P0.05)，10、20 、40 、80mg/ml 剂量华蟾素干预组细胞增殖活力均受到显著抑制（P0.05) 。 1 万方数据 3、Transwell 小室实验结果表明，与空白对照组相比较，TGF-β1 单独诱导组侵 袭及迁移能力均明显增强（P0.01 ），与TGF-β1 单独诱导组比较，2.5 、5mg/ml 剂量华蟾素干预组侵袭和迁移能力均明显减弱（P0.01 ）。 4 、QRT-PCR 检测结果显示，与空白对照组比较，TGF-β1单独诱导组E-cadherin 表达明显减弱（P0.01 ），Vimentin 表达水平明显增强（P0.01 ）；与TGF-β1 单 独诱导组比较，2.5mg/ml、5mg/ml 剂量华蟾素干预组 E-cadherin 表达显著增强 （P0.05 ），Vimentin 表达水平显著降低（P0.05 ）。 5、Western blot 检测结果表明，空白对照组、TGF-β1单独诱导组和2.5 、5mg/ml 剂量华蟾素干预组E-cadherin、Vimentin 灰度值分别为（0.9427 ±0.0254、0.4098 ±0.0679 ）、（0.3629 ±0.0303、0.7612 ±0.0472 ）、（0.5