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生物药物分析与检验[修订].doc
生物药物分析与检验生物药物分析与检验的特点:需要进行相对分子质量的测定、需要检查生物活性需做安全性检查需做效价测定要用生化法确证结构终点测定法的条件:必须有专一地作用该被测物质的酶,并能得到它的制品;能够确定使这种酶反应接近进行完全的条件;反应中底物的减少、产物的增加、辅酶物质的改变等可以借助简便的方法进行测定高效液相色谱法的定性分析1.利用已知物质定性的方法利用保留特性利用不同柱比较色谱法与其他方法结合定性利用化学反应定性利用选择性检测器定性液相色谱-质谱联用技术、液相色谱-核磁共振联用技术生物检定的范围:药物的效价测定体内微量生物活性物质的测定中药质量的控制某些有害杂质的限度检查基因工程药物的特点:分泌量极低而生理、药理活性极高具有细胞和组织特异性多数细胞生长因子具有多功能性细胞因子间存在复杂的相互作用具有低免疫原性特殊杂质检查方法:物理化学区分方法物理法“1. 臭味及挥发性的差异2. 颜色上的差异3. 溶解行为上的差异二、化学分析法1. 酸碱反应2. 呈色或沉淀反应3. 产生气体4.氧化还原反应免疫电泳技术:将琼脂电泳与免疫扩散结合起来,即利用电场作用下带电蛋白质在琼脂凝胶中具有不同的迁移率,以及相同的蛋白质具有完整的抗原性的特点,用于分析抗原或抗体性质的一种技术。电泳:带电颗粒在电场的作用下,向着与其电性相反的电极移动的现象。终点测定法:先借助酶反应(单独的反应或几种酶构成的偶数酶反应)使被测物质定量地进行转变,然后在转化完成后,测定底物、产物或辅酶物质(第二底物)等的变化量生物检定:利用生物体(整体动物、离体组织/器官、细胞和微生物等)的作用以测定其效价或生物活性的一种方法。质反应:当一定剂量的药物注入动物体内后,观察某一反应或反应的某一程度出现与否,只有质的变化。量反应:药物对生物体所引起的反应随着药物剂量的增加产生的量变可以测量者。杂志:指药物中存在的无治疗作用、或影响药物稳定性和疗效、甚至对人体健康有害的物质药典主要包括凡例、正文、附录和索引四部分组成 生物药物常用的定量分析法:酶法、电泳法、免疫分析法、理化测定法、生物检定法酶分析法包括酶法分析和酶活力测定酶联免疫吸附分析法包括直接法和夹心法电泳法分为自由界面电泳、区带电泳和高效毛细管电泳。指示液:溴酚蓝用于指示电泳终点;甘油比重大,使样品下沉SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的三种效应:分子筛效应、浓缩效应、电荷效应高效液相色谱法的优点:速度快、分辨率高、灵敏度高、柱子可反复使用、样品容易回收要获得较好色谱分离有两个途径:一是最大峰间的距离要大,二是色谱峰要窄常用的脱气方法:真空脱气法、煮沸脱气法、溶剂的滤过微生物检定法测定抗生素效价:稀释法,浊度法,管碟法。其中我国是管碟法。氯化物检查法:用硝酸,硝酸银硫酸盐检查法:用盐酸,氯化钡,标准对照液: 标准硫酸钾溶液铁盐检查法:中国药典和美国药典采用硫氰酸盐,英国药典采用巯基醋酸法重金属检查常用的显色剂:硫代乙酰胺、硫化钠澄清:不超过0.5号浊度标准液的浊度时;几乎澄清:介于0.5号至1号浊度标准液之间胰岛素的含量测定:高效液相色谱法;生物活性检查:生物测定法;生物检定法:小鼠血糖法、小鼠惊厥法、家兔血糖法氨基酸药物分析的含量测底酸碱滴定法——谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸非水溶液滴定法——甘氨酸、丝氨酸、亮氨酸、、、、、定氮法——精氨酸和天冬酰胺碘量法或溴量法——盐酸半胱氨酸、L-胱氨酸HPLC或氨基酸自动分析仪:谷丙甘氨酸胶囊等复方制剂蛋白质药物分析的含量测定定氮法——人胎盘的蛋白质测定电泳法——人血白蛋白的纯度测定高效液相色谱法——胰岛素含量测定生物检定法——硫酸鱼精蛋白的效价测定葡萄糖酸钙中蔗糖或还原糖类检查用的试剂是碱性酒石酸铜试液 蔗糖加硫酸煮沸后,用氢氧化钠试液中和,再加亚硫酸钠试液, 产生红色沉淀葡萄糖中存在的特殊杂质为糊精取乳糖5.0g,加热水25ml溶解,放冷,加硝酸汞试液5ml,5分钟内不得产生白色絮状沉淀,这是检查蛋白质类杂质葡萄糖注射液的含量测定方法为旋光度法用旋光度测定法测定葡萄糖氯化钠注射液时,加入氨试液的作用加速D—葡萄糖α和β两种互变异构体互变平衡的到达葡萄糖的Fehling反应所需要的试剂是碱性酒石酸铜Keller-Kiliani反应 α-去氧糖的反应 洋地黄毒苷、地高辛(靛蓝色)Kedde反应 不饱和内酯的反应 去乙酰毛花苷 (红紫色)纸色谱 地高辛1、葡萄糖注射液的鉴别反应是Fehling反应2、洋地黄毒苷的鉴别是Keller-Kiliani反应3、去乙酰毛花苷的鉴别反应是Kedde反应4、用于地高辛鉴别和特殊杂质检查的方法PC特殊杂质检查洋地黄毒苷 洋地黄皂苷 (灵敏度法)地高辛
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