实验五、维生素C的定量测定.pptVIP

一、目的与任务 学习维生素C 2，6-二氯酚靛酚定量测定法的原理和方法。 进一步熟悉、掌握微量滴定法的基本操作技术。 掌握果蔬类样品的处理及数据分析 了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。 二、实验原理 三、材料、试剂、器材准备 四、操作方法 其他事项 干扰滴定因素有： 色素：若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，可用白陶土脱色。 还原剂：样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动三角瓶直至呈粉红色，于15s内不消退为终点。 五、结果计算 六、课后研讨 实验五—维生素C的定量测定 （2，6-二氯酚靛酚法） 维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，又称抗坏血酸。对物质代谢的调节具有重要的作用。 维生素C是具有L系糖型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。 分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量丰富。 维生素C 脱氢维生素C 维生素 的结构 C 可以解离出两个H+ 烯二醇结构具有强还原性 脱氢形式不稳定易降解 二酮古乐糖酸 +H2O -H2O （还原型） （氧化型） 有活性 还原型与氧化型可相互转化 [O] 草酸+苏阿糖酸 易溶于水，溶于乙醇，不溶于乙醚、苯。 酸性溶液(pH＜4)较稳定，中性以上极不稳定。 对光、热、金属离子（铁、铜）敏感。 容易被氧化。 维生素C的特性 抗坏血酸分子中存在烯醇式结构 因而具有很强的还原性，氧化失去两个氢原子而转变成脱氢抗坏血酸。 结构 2,6-二氯酚靛酚钠盐特点 在酸性环境中氧化型2，6-二氯酚靛酚呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。 2,6-二氯酚靛酚钠盐（C12H6O2NCl2Na)染料具有氧化性，可氧化抗坏血酸而其本身被还原为无色的衍生物，可作为维生素C含量测定的滴定剂和指示剂。 本实验在酸性条件下进行，此条件下副反应进行得很慢。 用2，6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在抗血酸尚未完全被氧化时，滴下的2，6-二氯酚靛酚立即被还原为无色，当抗坏血酸全被氧化时，滴下的2，6-二氯酚靛酚溶液呈红色。所以在滴定过程中当溶液从无色转变为微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，为滴定的终点。 根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸（维生素C）的含量。 试剂配制： 材料： 苹果、梨、青椒、VC饮料等 1％、2％草酸溶液 2，6-二氯酚靛酚溶液： 称取0.21 g碳酸氢钠，0.26g 2,6-二氯酚靛酚，溶于250ml蒸馏水中，稀释到1000ml. 过滤，装入棕色瓶内，置冰箱内备用，保存不超过3天。每次临用前用新配制的标准抗坏血酸溶液标定。 标准抗坏血酸溶液：准确称取纯抗坏血酸结晶100mg溶于1％草酸溶液定容到100ml。装入棕色瓶中贮存冰箱内。 器材准备： 微量滴定管（5ml）、匀浆器、离心机等 微量滴定管的操作： 检查：用蒸馏水检查滴定管的活塞是否漏水，活塞转动是否灵活。 装滴定剂：摇匀试剂溶液，用试剂润洗滴定管2-3次，约装10-15ml左右。 排气泡：调节起始刻度（最好在整mL的刻度处，或调零，并记录初始刻度数。 滴定：勿顶活塞，防漏液，轻轻转动活塞，滴定时边用手腕轻轻摇动锥形瓶，近终点时要“半滴”操作——冲洗。 观察颜色的变化和读数。注意滴定管要垂直，视线与刻度平行，保留小数点后三位。 滴定完毕，清洗干净，凉干后在活塞处放一小纸片存放。 样品制备： 水洗干净整株新鲜蔬菜或水果，用纱布或吸水纸吸干表面水分。称取5g，加入20ml 2％草酸，匀浆，定容至50mL，8000rpm×10min离心，留上清。 为什么要用2%草酸溶液配制样品？ 准确量取1ml标准抗坏血酸溶液加入9ml 1％草酸溶液于100ml锥形瓶。 用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定，以生成为微红色持续15秒不退色为终点。 计算2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度，以每ml2，6-二氯酚靛酚溶液相当于抗坏血酸的mg数来表示。平行2次 取10ml 1％草酸液做空白对照，按以上方法滴定。 标定： 为什么要做标定？ 量取10ml样品提取液于锥形瓶中。用微量滴定管，以2，6-二氯酚靛酚溶液滴定样品提取液，呈微粉红色色，持续15秒钟不退色为终点，记录所用2，6-二氯酚靛酚的ml数。 另取10ml 2％草酸做空白对照滴定。 样品及空白同时各做2份。 滴定： 整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被其他还原剂氧化。每次滴定过程一般不超过2min。 滴定所用的染料应在1-4ml间。样品含