实验五 DMEM培养液的配制.pptVIP

实验五 DMEM培养液的配制 DMEM干粉 1瓶(1,000mL量) NaHCO3 3.7g L-谷氨酰胺 0.2g 超纯水 1,000mL 取清洗干净的500mL大烧杯一个，加入 新鲜制备的三蒸水约300mL，加热至15~ 30℃； 将DMEM干粉袋竖立轻弹，使袋中粉下 沉，剪开袋口，将干粉倒入500mL的大烧 杯中，用超纯水冲洗袋2~3次； 放入清洗干净的磁子，在磁力搅拌器充 分搅拌，以确保培养基干粉充分溶解； 根据配方要求，加入准确称取的NaHCO3 1.85g，L-谷氨酰胺0.1g，充分摇匀至完全 溶解； 加入已经制备好的双抗溶液，使青霉素 和链霉素的最终使用浓度达到100μg/mL； 加入培养基总体积约10％的已灭活的小 牛血清； 用浓度为7.4％的NaHCO3溶液调整溶液 的pH值为7.2~7.4，加超纯水定容，并将 培养液转入盐水瓶； 用一次性滤器过滤上述培养液到灭菌的 盐水瓶，封口，4℃保存备用。 用5mL的移液器准确移取盐酸21mL， 加入到279mL超纯水中。 * * 【能力目标】 熟练掌握DMEM细胞培养液的配制。 500mL大烧杯 玻璃棒 250mL/500mL盐水 瓶 酸度计 50mL小烧杯3个 孔径0.22μm 微孔滤膜 一次性滤器 一次性滤纸 去离 子水 灭活的小牛血清 DMEM干粉 青霉 素 链霉素 NaHCO3 超净工作台 磁力搅 拌器 电子天平 药匙 【实验材料】 【配方】 【配制方法】 【配制方法】 【配制方法】 实验五 1M HCl的配制 1M NaOH的配制 250mL烧杯 玻璃棒 250mL盐水瓶 一次 性滤纸 去离子水 电子天平 药匙 5mL 移液器 5mL吸头 NaOH 浓HCl 【实验材料】 【HCl的配制过程】 【NaOH的配制过程】 NaOH 10g 超纯水 250mL 边加边搅拌，溶解过程会产热。 【课程安排】 1、每组确定本组的D-Hank’s液是否有？ 是否已过滤除菌； 2、每组的EDTA需要高压灭菌； 3、需要配制新鲜的1M HCl和1M NaOH 溶液，以及7.4％的NaHCO3溶液； 4、需要重新灭菌5mL枪头； 5、每组准备一铝饭盒，内放小剪刀一把， 小镊子一把，手术钳一把，大剪刀一把， 高压灭菌； * * *