两种y-干扰素释放试验检测结核菌感染的对比研究.pdfVIP

河北医药2013年 10月 第35卷 第 19期 HebeiMedicalJo 20 Q ：12 2917 do|：10．3969／j．|ssn．1002-7386．2013．19．016 · 论 著 · 两种 一干扰素释放试验检测结核菌感染的对 比研究 朱桂云 杨永辉 安晓颖 康丽菲 陈宁 欧阳琴 【摘要】 目的 比较结核感染T细胞斑点试验 (T—SPOT．TB)和结核杆茵特异性细胞免疫反应 (A． TB)在结核诊断中的敏感性和特异性，分析两者的一致性。方法 选取 7O例临床患者的外周血标本，分别 采用T．SPOT．TB试剂盒和A．TB试剂盒进行 ．干扰素释放试验，比较两者在结核诊断中的敏感性、特异性 及一致性。结果 T．SPOT．TB的特异性稍高于A．TB，二者的敏感性差异无统计学意义(P 0．05)，两种 方法的一致性较强(P=1．000，K=0．819)。结论 两种 ．干扰素释放试验的方法具有较好的一致性，可 以根据临床需要选择不同的方法。 【关键词】 一干扰素释放试验；T—SPOT．TB；A．TB 【中图分类号】R378．911 文【献标识码】A 【文章编号】 1002—7386(2o13)19—2917—03 我国是结核病高发国家之一，每年新增结核病患者约 150 计数，根据计数结果用 AIM—V调节剩余细胞悬液浓度至2．5X 万。在结核病防治中，我们面临的最大难题之一就是如何快速 10／ml。 体外抗原刺激与孵育：取出试剂盒中的微孔板，1份 准确地诊断结核。^y一干扰素释放试验是一种新的诊断结核的 标本需4个孔，分别加入阴性对照 AIM．V、抗原 A(ESAT-6)和 辅助手段 ，因其具有较高的敏感性和特异性，已受到临床越来 抗原B(CFP．10)、阳性对照植物凝集素PHA各50 ，然后在每 越广泛的重视…。目前有两种较为成熟的^y一干扰素释放试验 孔中加入细胞悬液各 100 l，置于37℃，5％CO2培养箱中培养 方法，即酶联免疫吸附法 (ELISA)和酶联免疫斑点法 (ELIS— 16～20h后用PBS缓冲液洗板4次，加入新鲜稀释的酶标记单 POT) ．3J，本研究选用分别采用这两种方法的结核杆菌特异性 抗50 1，2—8~C孵育 1h后再用PBS缓冲液洗板4次，每孔加 细胞免疫反应 (A．TB)试剂盒和结核感染 T细胞斑点试验 (T— 入显色底物5O l，避光室温静置7rain后用蒸馏水冲洗观察结 SPOT．TB)试剂盒进行 ．干扰素释放试验，对比研究检测结果 果，用显微镜计数每个孔 中的斑点。③结果判定 ：阴性对照孔 的一致性，探讨二者的临床应用价值。 斑点数为0～5个，抗原 A和抗原 B检测孔任一孔计数一阴性 1 资料与方法 孔计数≥6判为阳性 ；如果阴性对照孔斑点数≥6，检测孔斑点 1．1 一般资料 随机选取2012年 1至6月初次在我院住院的 数≥2倍阴性孔斑点数判为阳性。 临床诊断为肺结核和待排除肺结核的患者7O例，其中男 38 1．3．2 A．TB检测：①全血刺激：每个入选病例采集3ml外周 例，女 32例；年龄 22—53岁，平均年龄 37．6岁。70例患者中 血标本置=F肝素锂抗凝的试管中，立即混匀 ，16h内进行刺激。 有44例确诊为肺结核 (以痰涂片发现抗酸杆菌或结核分枝杆 刺激时每个病例需取 3个无抗凝剂采血管做为反应管，阴阳性 菌培养阳性为标准)，剩余的26例均为排除肺结核的诊断，其 对照管分别加入阴性刺激剂 2O l、阳性刺激剂 20 l，测试管 中普通细菌感染引起 的肺炎 19例，肺癌4例，间质性肺炎 2 加入刺激剂 1(ESAT-6)10 l和刺激剂2(CFP一10)10 1；之后 例，结节病 1例。 每个采血管中各加入 1ml充分混匀的全血，盖紧盖子剧烈晃动 1．2 仪器与试剂 CO 培养箱，水浴锅，酶标仪。T-SPOT．TB 直至有泡沫出现，然后立即直立向上置于 37℃的水浴箱中孵 试剂盒 (英国OxfordImmunote