一种快速的水稻不同组织总蛋白提取方法.pdfVIP

福建农业学报 28(9)：884 887，2013 FujianJournalofAgriculturalSciences 文章编号 ：1008—0384 (2013)09—884—04 苏军，张武君，陈在杰．一种快速的水稻不同组织总蛋 白提取方法 [J]．福建农业学报 ，2013，28(9)：884—887． SuJ’ZHANGW—J，CHENZ-J．ASimpleandRapidApplicableProtocolforExtractingHigh—qualityTotalProteinsfromRice[J]．Fujian JournalofAgriculturalSciences，2013，28 (9)：884—887． 一 种快速的水稻不 同组织总蛋 白提取方法 苏 军，张武君 ，陈在杰 (福建省农业遗传工程重点实验室 ／福建省农业科学院生物技术研究所，福建 福州 350003) 摘 要 ：介绍一种简单快捷 的水稻不 同组织总蛋 白提取方法 。该方法采用预冷 甲醇和丙酮依次洗涤去除杂质和 次生代谢干扰物 ，同时在 甲醇洗涤步骤中加入蛋 白酶抑制剂混合液 ，能够最大限度地包含所有蛋 白质并降低蛋 白酶的降解作用，提高蛋 白质的质量和产量。采用该方法从水稻的根、茎、叶及发育中的种子中提取粗蛋 白， 产量为 2O～99mg ·g Fw ，提取蛋白整个过程耗时 1．6h。以SDS—PAGE胶及 WesternBlot检测所提总蛋白的 质量 ，分别用核蛋 白、胞浆蛋白、膜蛋白以及淀粉结合型蛋 白等不同类型蛋 白抗体进行 WesternBlot检验。结 果显示采用该方法所分离的总蛋 白质量可以满足水稻不 同类型蛋 白对 WesternBlot的质量要求 。 关键词 ：水稻 ；总蛋 白提取 ；WesternBlot 中图分类号：R284 文献标识码 ：A A SimpleandRapidApplicableProtocolforExtractingHigh—qualityTotalProteinsfrom Rice SU Jun，ZHANGWu—Jun，CHEN Zhai-Jie (FujianProvincialKeyLaboratoryofGeneticEngineeringforAgrc“ “re／B0Pf 0Z0g InstituteofFujian AcademyofAgriculturalSciences，Fuzhou，Fujian 350003，China) Abstract：A simpleandrapidapplicableprotocolforextractinghigh—qualityproteinsfrom ricetissuesisdescribed． Intheprotocol，precooling methanoland acetone isused tO precipitateproteinsand removecontaminantsand secondarymetabolites．Addingproteaseinhibitorsinmethanolforwashingisincludeallproteinstomaximizeand reducedegradationofproteases．Byusingthisprotocolthetotalproteinyieldofdifferenttissueswererangefrom 20 to99mg·g FW andtheentireprocesstaken1．6h．Toevaluatethequalityoftheextractedprotein，SDS／PAGE geland W estern Blotwereemployed． 4 antibodys represented differentprotein type include thenucleoprotein antibody，plasmosin antibody，membrane protein antibody and granule-bound