SNapshot微测序技术分析SNCA基因多态性与帕金森病关联性研究.pdfVIP

58 ·论 著 · 忠1048J《中国医刊》2013年第48卷 第 10期 SNapshot微测序技术分析 SNCA基因多态性与帕金 森病关联性研究 刘彬，张丽华，徐忠，计畅，庞爱兰，郑颖，吴春华，任惠 (昆明医科大学第一附属医院，云南 昆 明650031) 摘 要： 目的 检测帕金森易感基因SNCA(~356165、rs894278、rs4106153、rs7684318)4个单核苷酸多态 性位点，分析在帕金森 (PD)组与对照组人群基因频率的差异。方法 采用SNapshot微测序技术分析对云 南地区116例汉族 PD患者和95例健康对照组进行基因SNCA4个单核苷酸多态性位点分析 ，运用 SHEsis 软件进行连锁不平衡检验，SPSS13．0软件和等位基因频率、基因型频率比较 ，对比PD组与对照组之间频率 的分布差异。结果 PD组和对照组SNCA基因rs356165、~7684318等位基因分布、各基因型频率比较未存 在差异性 (等位基因P=0．29， =1．39；P=0．20，X2=1．57；基 因型频率P=0．21， =3．t1；P=0．22， = 2．95)。PD组和对照组SNCA基 因rs894278、rs4106153等位基因分布比较差异有显著性 (P=0．02， = 1．59；P=0．003， ：8．35)。在 ~894278位点各基因型频率 比较差异无显著性 (P：0．08， =4．96)，而 rs4106153各基因型频率比较差异有显著性(P=0．02， =7．11)。结论 云南省汉族人群中SNCA基因 ~894278和rs4106153与 PD显著相关，rs356165、rs7684318不与PD相关。rs894278位点的GG基因型和 rs4106153位点AA基因型与PD的发病密切相关，可能是PD的发生的遗传性危险因素。 关键词： 帕金森病；Alpha-synuclein基因；基因多态性 中图分类号：R742．5 文献标识码：A 文章编号 ：1008—1070(2013)10—0058—03 doi：10．3969／j．issn．1008—1070．2013．10．024 SNCA(Alpha．synuclein)基因，又称 PARK1基因，前 时期医院进行健康检查，结果正常且没有PD表型的 人的研究提示SNCA的多态性突变是散发性帕金森病 汉族正常人95例为对照组，男74例，女21例；年龄 (PD)的危险因素 J。PD的主要病理学特征是中脑黑 (66．0-47．5)岁。年龄、性别与病例组相匹配。本研究 质致密部多巴胺能神经元的选择性变性、死亡，以及在 中个体之间无血缘关系，均为云南地区汉族人群。研 残存的神经元胞浆中出现嗜酸性的淀粉样蛋 白包涵 究项 目通过昆明医科大学第一附属医院伦理委员会批 体——leWy小体。lewy小体主要是一些中空的放射性 准，所有参加人员均签署知情同意书。 淀粉样纤维A．共核蛋白，在PD的发病和发展过程 中具 1．2 实验方法 有重要作用，与家族性和散发性PD密切相关 。本研 1．2．1 实验步骤 取抗凝外周静脉血2ml一提取 白细 究采用 SNapshot微测序技术分析，选取 SNCA基因4个 胞基因组DNA--+PCR扩增 目的基因一PCR产物纯化一 单核苷酸多态性(SNP)位点，对云南省汉族散发性帕金森 SNapshot延伸反应一序列测定、分析。应用酚／氯仿抽 病和健康对照组进行关联性分析，探讨上述4个位点与 提法从 白细胞提取基因组DNA。对 SNCA基因4个位 云南汉族人群PD的关联性，为PD防治提供遗传依据。 点进行连锁不平衡分析，用 LD统计量 D’表示，在所有 1 资料和方法 6个配对组合中，未检测到强连锁不平衡(D’0．8)。 1．1 研究对象 选取 2010年 5月至 2012年 9月在 1．2．2 PCR引物的设计、扩增 用于PCR扩增单核 本院就诊及住院汉族患者，年龄4O～80岁，诊断标准： 苷酸多态性位点所用引物序列：引物通过primerprem— ①轻度但肯定的静止性震颤，幅度中等，至少一侧上