I-BmKCT对胶质瘤细胞侵袭的影响-中国科学院上海应用物理研究所.PDFVIP

第36 卷 第8 期 核 技 术 Vol. 36, No.8 2013 年8 月 NUCLEAR TECHNIQUES August 2013 125I-BmK CT 对胶质瘤细胞侵袭的影响 孙 娜 赵晋华 乔文礼 赵凌舟 （上海交通大学附属第一人民医院核医学科 上海 200080 ） 摘要 东亚钳蝎神经毒素(BmK CT)能特异性地阻断神经胶质瘤细胞的氯离子通道，抑制胶质瘤细胞的侵袭力。 125 125 本文旨在研究 I-BmK CT 对大鼠胶质瘤细胞(C6)侵袭的影响及作用机制。采用transwell 小室评价 I-BmK CT 对C6 细胞侵袭能力的影响，采用酶联免疫吸附试验(ELISA 法) 、实时荧光定量聚合酶链反应(Real-Time PCR) 和Western-Blot 检测125I-BmK CT 对C6 的基质金属蛋白酶-2(MMP2)基因和蛋白表达水平的影响。实验结果表 125I-BmK CT 可显著抑制C6 细胞的侵袭能力(P ＜0.05) ；显著抑制C6 细胞分泌MMP2(P ＜0.05) ；C6 细胞 明， 经125I-BmK CT 处理后，MMP2 的mRNA 表达未见明显变化，差异无统计学意义(P ＞0.05)，MMP2 的蛋白合 成被显著抑制(P ＜0.05) 。研究结果证明，125I-BmK CT 可显著抑制C6 细胞的侵袭能力，其机制可能与MMP2 的分泌和蛋白合成水平降低有关。 关键词 125I-BmK CT，基质金属蛋白酶-2，胶质瘤 中图分类号 TL99 DOI: 10.11889/j.0253-3219.2013.hjs.36.080301 脑胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤，多呈浸润 1 材料与方法 性生长，难以切除干净，治疗后常于瘤床2 cm 范围 内复发，目前治疗效果不尽如人意。蝎氯毒素(Cltx) 1.1 材料 是Debin 于1991 年在蝎毒中发现的具有36 个氨基 Na 125I 溶液由上海欣科医药有限公司提供； 酸残基的短肽[1]，Cltx 通过抑制胶质瘤特有的氯离 BmK CT 由同济大学蛋白质研究所合成，C6 购自中 子通道可特异性抑制神经胶质瘤细胞的迁移与浸 国科学院上海生命科学研究院；胎牛血清、马血清 润，而对正常脑细胞无影响。此外，Cltx 在胶质瘤 购自美国Gibco 公司；Ham’s F12K 培养基购自德国 细胞膜还有特异性受体存在，这一受体是基质金属 Applichem 公司；Matrigel 胶购自美国 BD 公司； 蛋白酶-2 (Marx metallopmteinase-2，MMP2) ，正常 Transwell 小室购自美国Corning 公司；ELISA 试剂 胶质细胞表面无表达，Cltx 可明显降低胶质瘤细胞 盒购自上海普胜生物公司；PCR 试剂盒购自日本 MMP2 的活性，并可减少质膜上MMP2 的表达量， Takara 公司；特异性PCR 引物由上海生物工程技术 从而抑制神经胶质瘤的转移与侵袭[2] 。东亚钳蝎神 服务公司合成；Western blot 所用一抗购自英国 经毒素(Buthus martensii Karsch CT，BmK CT)是由 abcam 公司，二抗购自美国 Cell Signaling 公司。 东亚钳蝎中纯化出来的神经毒素，其序列与蝎氯毒 125