稳定表达人Eps8基因的胶质瘤U251细胞系的建立.pdfVIP

第 19卷第4期 激 光 生 物 学 报 V0l_l9 No．4 2010年 8月 ACTA LASER BIOLOCY SINICA Aug．2010 doi：10．3969／j．issn．1007—7146．2010．04．006 稳定表达人 8基因的胶质瘤 U251细胞系的建立 周芳亮 ，胡 翔 ，杨子剑，韩 梅 ，丁小凤 (湖南师范大学生命科学学院，蛋 白质化学与发育生物学教育部重点实验室，湖南 长沙410081) 摘 要：应用亚克隆方法构建pEGFP．C3／Eps8真核表达载体，经测序鉴定后，用脂质体进行胶质瘤U251细胞 的转染，应用G418筛选出稳定表达 pEGFP—C3／Eps8和pEGFP—C3的细胞系，最后通过Westernblot和荧光定位 证明 娼在 U251细胞中过量表达。本实验成功建立 了稳定转染 印s8的U251细胞系，为进一步研究Eps8基 因在胶质瘤中的功能奠定 了良好的实验基础。 关键词 ：Ep娼基因；真核表达载体；U251细胞；稳定表达 中图分类号：Q78 文献标识码 ：A 文章编号：1007-7146(2010)04_04494 EstablishmentofU251CellLineforStableExpression ‘ ofHuman Eps8Gene ZHOUFang—liang，HUXiang，YANGZi-fian，HANMei，DINGXiao-feng (KeyLaboratoryofProteinChemistryandDevelopmentBiologyofState，EducationMinistryofChina， CollegeofLifeScience，HunanNormalUniversity，Changsha410081，Hunan，China) Abstract：TheeukaryoticexpressionvectorpEGFP—C3／Eps8wasconstructedbythesub—cloning．Afterverifiedbyse— quencing，wetransfectedtheplasmidsintoU251cellsbyLipofectamineTM 2000．AfterscreeningbyG418，stabletrans— fectedcelllineswereestablishedtoexpresspEGFP—C3／Eps8and pEGFP—C3．Finally，theoverexpressionofEps8was demonstratedbywestern blottingandfluorescencelocalizationassays．Takentogether，U251celllinestablyexpressing 印娼 isestablished，whichwilllayasolidexperimentalofundationforfurtherstudiesonthefunctionof印娼geneinglio- macells． Keywords：印娼 gene；mammalianexpressionplasmid；U251cell；stableexpression 恶性胶质瘤是一种最常见的颅 内恶性肿瘤 ，其 受体的一个底物 ¨，后来报道Eps8也是一个骨架蛋 高致残率、短生存期和低生活质量威胁 了中青年的 白，可以形成多蛋 白复合体以传递生长因子信号激 生命。胶质瘤具有生长迅速和高度侵袭的生物学特 活Rho家族 GTP酶。 s8促进生长因子诱导Rac的 征 ，而 目前治疗后