大孔吸附树脂分离纯化培养基残基中虫草素.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１４，３４（１）：９０９４ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 大孔吸附树脂分离纯化培养基残基中虫草素 李从镇　毛　宁 （福建师范大学生命科学学院工业微生物发酵技术国家地方联合工程研究中心　福州　３５０１０８） 摘要　采用大孔吸附树脂分离纯化人工蛹虫草培养基残基中的虫草素，以ＨＰＬＣ法测定样品中虫 草素含量，筛选出了适宜的大孔树脂ＮＫＡＩＩ。研究了ｐＨ、洗脱剂乙醇体积分数等因素对该树脂 吸附性能及解析性能的影响。结果表明，ＮＫＡＩＩ型树脂纯化虫草素的最佳吸附条件为ｐＨ９，吸附 流速２ＢＶ／ｈ，该树脂对虫草素的吸附量可达到１６．５ｍｇ／ｇ。洗脱工艺条件为２．５倍树脂柱体积的 ５０％乙醇，ＮＫＡＩＩ大孔树脂对虫草素的解析率可达到９５％以上。 关键词　虫草素　大孔树脂　分离纯化 中图分类号　Ｑ９３９．９７ １．３　试验方法 １　材料与方法 １．３．１　树脂预处理　使用９５％ 乙醇浸泡过夜，充分 １．１　实验材料与仪器设备 溶胀，湿法装柱，９５％ 乙醇清洗，至流出液加水不显浑 　　人工蛹虫草培养基残基：由江苏徐州康源虫草生 浊为止，再用蒸馏水洗尽乙醇，备用。 物有限公司提供，经 ＨＰＬＣ检测虫草素的含量为０． １．３．２　树脂的筛选　称取已处理好的 ＨＰＤ７２２、 １８％；虫草素标准品：购自中国药品生物制品检定所； ＨＰＤ７５０、ＡＢ８和ＮＫＡＩＩ大孔树脂各２ｇ，加入２０ｍｌ、 ＮＫＡＩＩ大孔吸附树脂：天津市海光化工有限公司； ｐＨ９的虫草素粗体液充分混匀，置于摇床１１０ｒ／ｍｉｎ振 ＨＰＤ７２２、ＨＰＤ７５０、ＡＢ８大孔树脂：沧州宝恩吸附材料 荡２４ｈ，取上清测定虫草素含量，计算各树脂对虫草素 科技有限公司。 的吸附量。吸附后的树脂用水洗涤３次后，分别用２０ 　　ＨＤ２１８８紫外检测仪、ＢＴ１１００恒流泵（上海琪 ｍｌ体积分数７０％ 乙醇洗脱，洗脱液经高效液相测定虫 特分析仪器有限公司）、ＢＳＴ１００自动部分收集器、层析 草素含量并计算洗脱率。 柱 １１０ｃｍ×３０ｃｍ（上海沪西分析仪器有限公司）、安 １．３．３　ｐＨ对树脂吸附性能的影响　称取２ｇＮＫＡＩＩ Φ 捷伦１１００高效液相色谱系统（可变波长扫描紫外检测 树脂共７份，分别加入２０ｍｌ粗提液，ｐＨ分别为３，６．５， 器）。 ８，９，１０，１１，１２，充分混匀，置于摇床 １１０ｒ／ｍｉｎ振荡 　　培养基残基预处理：将蛹虫草大米残基粉末按料 ２４ｈ，取上清液分别测定虫草素含量。 液比１∶１５加入水浸提３次，每次２ｈ，水温４０℃，合并 １．３．４　树脂动态吸附过程中上柱流速对吸附性能的 ［５］ 影响　分别取处理好的ＮＫＡＩＩ大孔树脂各１０ｇ装柱， 提取液将其浓缩到提取料的３倍体积 。 １．２　虫草素检测 用浓度为０．８２ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ９的虫草素粗提液上柱，上柱 　　色谱柱：ＺＯＲＢＡＸＳＢ２Ａｑ（２５０ｍｍ ×４１６ｍｍ）；流 速度分别为１，２，３ＢＶ／ｈ，达到平衡后，收集流出液，计 ［６］ 动相∶乙腈水（１０∶９０），体积流量：０．９ｍｌ／ｍｉｎ，检测波 算流出液中虫草素的含量并检查泄漏点 ，流出液中 长：２６０ｎｍ，进样量：３０ｌ，柱温：３０℃。虫草素标准曲线 虫草素浓度达到上样浓度的１０％时，即为泄漏点