肿瘤相关抗原及其抗体检测在恶性肿瘤诊断中的应用-中国医药生物技术.pdfVIP

376 中国医药生物技术 2013 年 10 月第 8 卷第 5 期 Chin Med Biotechnol, October 2013, Vol. 8, No. 5 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2013.05.008 ·综述· 肿瘤相关抗原及其抗体检测 在恶性肿瘤诊断中的应用 王明，齐义军，刘瑞敏，马瑾 多数恶性肿瘤患者确诊时已发展至中晚期，治疗措施及 菌体外壳蛋白形成融合蛋白并表达于噬菌体表面，或者利用 效果有限，是导致恶性肿瘤患者高死亡率的根本原因之一。 随机肽库对多个抗原表位库进行筛选。在第一轮的生物淘选 然而，早期诊断和治疗能够明显提高恶性肿瘤患者的治愈 过程中，蛋白 G 微珠首先与非癌对照血清孵育，然后与噬 率，降低死亡率，延长患者生存时间。因此，近年来的研究 菌体肽库孵育，以去除非特异性结合的噬菌体亚克隆。第二 热点之一是寻找恶性肿瘤早期诊断的生物标志物，以便早期 轮的生物淘选是将蛋白 G 微珠与癌患者的血清孵育，然后 [1] 发现，彻底治愈 。 与上述已去除非特异性结合的噬菌体孵育，洗去未接合噬菌 肿瘤在发生和发展过程中会伴随产生许多异常的蛋白 体后，洗脱与血清自身抗体结合的噬菌体，然后经扩增，并 质分子，从而激发体内的免疫应答系统，产生自身抗体。这 进行下一轮的筛选。如此经过 3 ~ 5 个周期“吸附-洗脱-扩 些自身抗体的出现不仅代表了肿瘤与宿主之间的相互作用 增”的过程，使与肿瘤患者血清中抗体特异性结合的噬菌体 [2] 及影响，并在一定程度上能够反映肿瘤的演进过程 。 得到高度富集。最后，对这些阳性噬菌体克隆进行测序分析。 此外，还可将这些阳性噬菌体克隆排列于载玻片或硝酸纤维 1 肿瘤相关抗原 素膜上，进一步筛选或验证。目前，噬菌体肽库展示中最常 肿瘤相关抗原（tumor-associated antigen ，TAA ）是在肿 使用的噬菌体是丝状噬菌体家族（filamentous phage family， [7] 瘤发生发展过程中高表达的，能够诱发机体发生免疫应答的 Ff ）的 M13 、f1、Fd 、ft，以及溶解性噬菌体 T7 。 抗原，也可少量表达于正常组织。大量研究表明：TAA 出 Zhong 等[8]应用乳腺癌噬菌体 T7 cDNA 文库进行生 现于多种肿瘤，如肺癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、 物淘选、鉴定乳腺癌相关蛋白，共得到 100 个候选噬菌体 肾癌、头颈部癌、食管癌、淋巴瘤、白血病等[3] 。TAAs 免 克隆，测序结果表明：其中的 6 个噬菌体克隆具有独特的 疫原性来源于突变的氨基酸序列、蛋白的异常剪切体、成年 表达阅读框架。进一步应用 ELISA 验证这 6 种克隆的噬 后胚胎蛋白的重新表达、异常凋亡或坏死产物、胞内蛋白异 菌体的临床应用价值，鉴定出其中 3 种 TAAs ：锚定蛋白、 常分布（如核蛋白的分泌）、内含子序列表达、蛋白磷酸化 含丝氨酸活性位点的蛋白