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畜牧兽医学报 ， （）：
２０１２４３３ ４３１４３７
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猪肺炎支原体犘４６基因的原核表达与
间接犈犔犐犛犃方法的建立
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沈青春 ，王 芳 ，韩明远 ，覃青松 ，范学政 ，杨汉春 ，宁宜宝 ，
（ 中国农业大学 农业部人畜共患病重点开放实验室，北京 ； 中国兽医药品监察所，北京 ）
１． １００１９３ ２． １０００８１
摘 要：猪肺炎支原体是猪喘气病的病原体，本研究选择猪肺炎支原体 Ｐ４６膜蛋白基因亲水区序列进行克隆，并
将其内 个编码 的 突变成 ，然后再克隆到 （ ）载体中，在大肠杆菌 （ ）细胞内实现
３ Ｔｒ ＴＧＡ ＴＧＧ ＥＴ２８ａ＋ ＢＬ２１ＤＥ３
ｐ ｐ
了高效表达，表达产物相对分子质量约为 ３１ｋｕ，约占菌体总蛋白３５％，表达形式为包涵体，通过 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ
证明表达产物与猪肺炎支原体高免血清具有很好的反应原性和特异性。将大肠杆菌表达的猪肺炎支原体 Ｐ４６重
组蛋白经过洗涤、过柱纯化后，作为间接 ＥＬＩＳＡ包被抗原用于检测猪血清中猪肺炎支原体抗体，通过对各参数和
试剂的优化建立了ｒＰ４６ＥＬＩＳＡ方法，获得了较好的效果，通过与现有 ＥＬＩＳＡ检测方法的比较，结果表明二者间具
有较高的符合率。
关键词：猪肺炎支原体； 蛋白；原核表达；
Ｐ４６ ＥＬＩＳＡ
中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ）
Ｓ８５２．６２ Ａ ０３６６６９６４２０１２０３０４３１０７
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