关于毛细管液滴技术的血液乙型肝炎病毒DNA提取.pdfVIP

第39卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第5期 2011年5月 ChineseJournalof 670～674 AnalyticalChemistry 基于毛细管液滴技术的血液乙型肝炎病毒DNA提取 梁广铁 王秋平 王维 刘大渔。 周小棉 (广州医学院附属广州市第一人民医院检验科临床化学技术研究室，广州510180) 摘 要基于毛细霄被滴技术，建立了，提取血液中乙型肝炎病毒(HBV)DNA的方法。方法的基本原理是向 聚四氟乙烯毛细管中连续引入油相和水相溶液时。由于表面张力作用，可以形成稳定的油包水型液滴。依次 引人含有不同试样的液滴。在毛细管中完成进样、DNA结合、洗涤以及洗脱等过程。实验表明，采用蛋白酶K 裂解和提高洗脱温度有利于提高DNA回收率。优化后的血清HBVDNA提取操作在25min内完成，回收率 大于60％。本方法的DNA提取量与常规方法相当，而相对标准偏差较大(23．3％US12．9％)。本方法具有简 单、快速和低成本的优势，有望成为一种微全核酸分析系统样品前处理的有效解决方案。 关键词 微全核酸分析系统；DNA提取；液滴；毛细管；乙型肝炎病毒 l 引 言 微全分析系统是将分析实验室的全部功能集成于一个微型化装置，应用于包括分子诊断、细胞分析 等领域“~3】。用于核酸分析的微全系统主要包括DNA纯化、扩增与检测等功能单元。已报道的多种基 于微流控芯片平台的微全核酸分析系统，显示出了微型化、集成化、低消耗以及分析快速的优势Ⅲl。芯 片微全核酸分析系统也面临一些问题。如加工和使用成本高、控制复杂等。针对这一问题，许多研究者 致力于开发低成本微型化核酸分析装置。以标准毛细管№~81为反应器的振荡流PCR装置，为实现低成 本微全核酸分析带来了希望。上述装置使用压力差【61或微量注射泵f7，剐驱动PCR液滴在不同温度区间往 复运动，实现热循环反应。这种设计减少了温度变化延迟，因而可以显著缩短反应时间。由于使用标准 毛细管作为反应器，振荡流PCR装置具有明显的成本优势。这种核酸分析方法面I临的问题是未能集成 核酸提取与纯化，因而尚不能实现集成化核酸分析。针对该问题，本研究基于毛细管液滴技术，建立了 Bvirus，HBV)DNA。本方法利用聚四氟乙 DNA提取方法，并用于提取血液中乙型肝炎病毒(Hepatitis 烯(PTFE)的疏水特性。在毛细管中形成油包水液滴。通过向毛细管中依次引入含有不同试样的液滴完 成DNA提取及纯化。本方法有望与振荡流PCR结合，发展成为低成本微全核酸分析系统。 2 实验部分 2．1 实验装置 a)有两个温度控制模块，每个模块从上至下分别为聚碳酸酯盖板、带有毛 自行搭建的分析装置(图l 细管嵌合沟槽的加热铝板、Peltier加热片(北京帕尔贴公司)以及固定铝板。加热铝板表面有8个平行 沟槽，嵌有聚四氟乙烯毛细管(内径1．0mm，外径1．4mm，江苏宏泰公司)。毛细管末端与多通道微量注 射泵(保定兰格公司)连接，通过设定注射泵运行程序控制管中液滴的运动。在温控模块上方的聚碳酸 酯盖板上有沟槽。用于插入磁铁。加热铝板镶嵌有PT100温度传感器(东阳=三星公司)，与温控器(日本 Yamatake公司1连接，用于探测温度。计算机控制软件根据温度感应反馈信号至温控器，控制下位继电 器是否输送电流至Peltier加热片。控制软件界面显示已经运行和尚未进行的注射泵运行程序，以及各 个温度模块的设定与实际温度。 2．2 DNA提取与纯化 毛细管中DNA提取使用磁珠提取试剂盒(杭州博日公司)。HBV阳性与阴性样品(小牛血清。美国 2010-10-13收稿；2010-1223接受 资助 +E-maih mark@126．corn 万方数据 镕5Ⅻ 镕r*#：*f％目*《满$∞mnz§H女☆§DNA*取 。篇}in。二==蛋臣二j疆 。蕊。