第17色及谱分析概论.pptVIP

色谱法概述 色谱过程和术语 色谱法基本理论 基本类型色谱的分离机制 第一节 色谱法概述 一、色谱法（chromatograph）的起源和发展 1．1906年由俄国植物学家Tsweet创立 植物色素分离见图示 2、1931年β－胡萝卜素异构体的分离 3、30～40年代TLC、PC平板色谱法的出现 4、40年代瑞典科学家Tiselius等在分配液相色谱、 吸附色谱和电泳领域取得了成果※ 5、50年代英国Martin和Synge建立GC色谱※ 6、60年代GC-MS联用 7、70年代HPLC崛起 图示 固定相——CaCO3颗粒 流动相——石油醚 2．现在：一种重要的分离、分析技术 分离混合物各组分并加以分析 固定相——除了固体，还可以是液体 流动相——液体或气体 色谱柱——各种材质和尺寸 被分离组分——不再仅局限于有色物质 色谱学的重要作用 应用的科学领域：生命科学、材料科学、环境科学等 药学： 1、教材内容多，约占全书的三分之一。 2、药学各个专业都会用到色谱分析法 药典 2005年版 2000年版 Ⅱ部 药品 1967种 1699种 HPLC分析 848种 567种 3、考研 大综合包括分析、有机、生理、生化 其中分析75分约近一半是色谱内容 二、色谱法定义、分离基础和目的 图示 分离机制： 各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心 利用吸附剂对不同组分的吸附能力差异而实现分离 吸附→解吸→再吸附→再解吸→无数次洗脱→分开 2．按固定相的固定方式分： 续前 3．按分离机制分： 色谱法简单分类 四、色谱法的特点 优点：“三高”、“一快”、“一广” 缺点： 第二节 色谱过程与术语 一、色谱过程 二、基本术语 一、色谱过程 色谱过程：指物质分子（被分离组分）在相对运动的 两相（流动相和固定相）中的“分配”平衡过程 以吸附色谱为例见图示 色谱过程： 吸附→ 解吸→再吸附 →再解吸 →反复多次洗脱→被测组分分配系数不同→ 差速迁移 → 分离 图示 吸附能力弱的组分先流出 吸附能力强的组分后流出 二、基本术语 流出曲线（色谱图 chromagtogram）：电信号强 度随时间变化曲线 色谱峰(peak)：流出曲线上突起部分 2．基线、噪音和漂移 base line, noise and drift 基线：仅有流动相通过检测器时产生 的信号曲线。反映检测器噪音 随时间变化的曲线 （稳定—平直直线） 噪音：仪器本身所固有的，以噪音 带表示（仪器越好，噪音越小） 漂移：基线向某个方向稳定移动 （仪器未稳定造成） 3．峰宽 peak width：色谱柱效参数 标准差σ： σ为正态分布曲线两拐点间距离的一半。 对应0.607h处峰宽的一半 注：σ↓小，峰↓窄，柱效↑高 半峰宽W1/2：峰高一半处所对应的峰宽 峰宽W：色谱峰两侧拐点切线与基线相交的截距 图示 4．峰高和峰面积：色谱定量参数 峰高(peak height；h)：组分在柱后出现浓度 极大时的检测信号，即色谱峰顶至基线的 距离。 峰面积(peak area；A)：色谱曲线与基线间 包围的面积。 5．保留值：色谱定性参数 保留时间 retention time, tR：从进样开始到组分出现浓度极大点时所需时间，即组分通过色谱柱所需要的时间 死时间dead time, t0：不被固定相滞留组分的保留时间，相当于流动相到达检测器所需要的时间 调整保留时间tR’：组分由于和固定相作用，比不作用的组分在柱种多停留的时间，即组分在固定相中滞留的时间。等于组分的保留时间与死时间之差值 图示 续前 保留体积VR：从进样开始到组分出现浓度极大点时所需要的 流动相的体积。 VR与tR和Fc（流动相流速mL/min）的关系 死体积V0：由进样器至检测器的流路中未被固定相占有的空间 体积。包括从进样器到色谱柱导管的体积、固定相的孔隙及颗 粒间隙、 柱出口导管及检测器内腔体积的总和。 续前 调整保留体积VR’：保留体积与死体积之差，即组分