黄芩素在大鼠体内的药代动力学研究-gai.docVIP

黄芩素在大鼠体内的药代动力学研究 黄芩苷（baicalin）及其苷元黄芩素（baicalein）是中药黄芩(Radix Scutellariae)的重要成分[1]，黄芩苷即黄芩素的7-葡萄糖醛酸苷，为黄芩素经给药后在体内血液中发现的主要代谢产物。中药黄芩是唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi 的干燥根，具有抗菌、抗病毒、保肝、利胆、利尿、抑制肿瘤细胞生长、诱导细胞凋亡等多种药理作用及较好的临床应用前景[2]。 文献报道，黄芩苷在肠内菌群作用下转化为黄芩素而吸收，然后再于体内还原为黄芩苷[3]。黄芩苷由于极性大不能直接吸收入血, 在肠道菌群β-葡萄糖醛酸苷酶作用下转化为黄芩素, 黄芩素在小肠黏膜中的UDPG-葡萄糖醛酸转移酶作用下转化为黄芩苷后部分吸收入血, 部分又被黏膜细胞中的MRP2 蛋白外排到肠腔[4]; 还有一部分黄芩素直接吸收入血后被肝微粒体转化为黄芩苷及其他代谢物[ 2, 5~9 ]。 大鼠口服黄芩素后，在血中迅速地转化为黄芩苷及其代谢物，黄芩素的代 谢产物不仅包括7-葡萄糖醛酸苷，也包括6-OH和5-OH的葡萄糖醛酸代谢物及黄芩素硫酸酯的多种结合物。故用酶水解法并不能准确地分别测定血浆中黄芩苷和黄芩素含量。在此我们用沉淀法分别测定黄芩素和黄芩苷的含量，并用酶水解法测定黄芩素和黄芩苷的总量[10] 。 口服黄芩苷吸收较差[11]。大鼠以活性较强，吸收较快的黄芩素灌胃。 为了比较体内黄芩素及其主要代谢物黄芩苷的相互转化关系，建立了LC-MS/MS法同时测定大鼠灌胃黄芩素后，血浆中黄芩素及其主要代谢物黄芩 苷的浓度。 一、试验部分 1、材料与试剂 黄芩素包衣片剂（供试验用，中国药科大学药剂教研室，678mg/片，100mg黄芩素/片，包衣材料为HQS，26mg/片）。黄芩素、黄芩苷对照品（中国药科大学天然药化教研室，纯度均大于99.0%），木犀草素（内标）。 甲醇（色谱纯，美国Merck公司），乙腈（色谱纯，美国Sigma公司），CMC-Na，醋酸铵，甲酸均为市售分析纯，水为纯净水。 SD 大鼠，体重250g左右，雌雄各半，由东南大学医学院实验动物中心提供。许可证号：SYXK(苏)2002-0012。 2、方法 （1）仪器及测试条件 Finnigan Surveyor LC-TSQ Quantum Ultra AM 液相色谱-三级串联四极杆质谱（LC-MS/MS）系统（Thermo Finnigan）。 色谱-质谱条件：采用Lichrospher C18（150mm(6.0mm I.D，5μm）色谱柱，甲醇-10mmol醋酸铵(0.5%甲酸)（74:26，v/v）为流动相，流速1mL/min。柱温35℃，分流比3:1。电喷雾离子化，正离子APCI检测；喷口电压为4900V，雾化气压35kPa，辅助气压力5 kPa，毛细管温度300℃，CID碰撞能量8eV，CID碰撞气氩气压力1.5(10-1 Pa；用于定量的SRM检测离子为：黄芩素 [M+H]+ 270.9→122.8，黄芩苷为[M+H]+ 447.0→271.3，木犀草素[M+H]+ 274.3→149.0。见图1。 A B C 图1 黄芩素(A) 、黄芩苷 (B) 木犀草素(C) （2） 溶液制备 黄芩素、黄芩苷工作溶液：取黄芩素和黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成每1mL中含黄芩素和黄芩苷分别为1mg的溶液，再用甲醇（含1%维生素C）稀释成黄芩素、黄芩苷浓度各为0.05，0.1，0.2，0.5，1，2，5，10 (g/mL的系列工作溶液。 内标溶液：取木犀草素适量，精密称定，加甲醇溶解，制成每1mL中含10μg的溶液。 （3） 血浆样品处理 取大鼠肝素抗凝血浆200(l 置1.5mL塑料离心管中，精密加入内标溶液20(l，磷酸二氢钾（1mol/l）100(l，甲醇-乙腈（1:1 v/v）700(l，涡旋混合3min，离心5min（10000 r/min），分取上清液800(l，40℃水浴中氮气流吹干，以流动相100(l溶解残渣，离心（10000 r/min）5分钟，取20(l进行LC-MS/MS分析。 （4） 动物实验分组及过程 高剂量组：取大鼠6只，雌雄各半，体重250g左右，实验前12h禁食不禁水，灌胃给药，剂量为130 mg.kg-1。 中剂量组：取大鼠6只，雌雄各半，体重250g左右，实验前12h禁食不禁水，灌胃给药，剂量为65 mg.kg-1。。。 于给药前（0min）及给药后5、10、20、40、60min、2h、3h、4h、6h、10h、14h、24h由眼眶后静脉丛