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乌司他汀治疗失血性休克实验探究 　 作者：于亚新 刘宝华 李海峰 刘晓亮 【摘要】 目的 探讨乌司他可应用失血性休克治疗时血管活性物质一氧化氮(NO)和血管内皮素(ET)水平的变化及其意义。方法 复制大鼠失血性休克模型，于复苏时予以乌司他汀治疗，采用酶联免疫法(ELISA)测定大鼠血浆一氧化氮合酶(NOS)及血管内皮素(ET)的含量。结果 对照组血浆cNOS呈逐渐下降趋势，而治疗组2 h及4 h时cNOS均明显上升(P＜0.05)。对照组血浆中iNOS在体克末及复苏时均明显上升，而治疗组在复苏后iNOS测定值明显下降。治疗组在复苏后2 h及4 h与对照组相比对ET的增高有明显抑制(P＜0.05)。结论 失血性休克后体内iNOS及ET升高，乌司他汀对其升高有抑制作用，并可促进cNOS的释放，从而对机体起保护作用。 【关键词】 失血性休克；乌司他汀；NO；ET 乌司他汀(ulinastatin，UTI)具有稳定溶酶体膜，抑制溶酶体酶及炎症介质的释放和产生，抑制过量超氧化物的生成和清除产生的超氧化物，清除氧自由基的作用，可以较好的控制炎症发展〔1〕，但其抗休克的治疗机制并未完全明了。本研究通过建立失血性休克大鼠模型，于休克不同时期给予不同剂量的UTI，观察其对休克过程中一氧化氮(NO)及内皮素（ET)的影响，探讨UTI在失血性休克过程中的治疗作用及可能机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 健康成年SD大鼠，体重(250±20)g，雌雄不限，由吉林大学白求恩医学部实验动物中心提供。UTI购于Sigma公司(美国)，Glison记录仪产于Glison公司(美国)，：P231D血压器，产于GoudStatham公司(美国），核酸蛋白分析仪DU640型产于Beckman公司(美国)，NOS及ET检测试剂盒购于南京生物所。乌拉坦、氯醛糖、枸橼酸钠，均购于上海化学试剂公司。 　　1.2 动物模型的制作 SD大鼠采用双侧股骨创伤法建立创伤性休克模型〔2〕。大鼠腹腔注射乌拉坦和氯醛糖麻醉后，右侧颈动脉、颈静脉插管，以生理记录仪监测血压变化并输液复苏，用枸橼酸钠抗血凝，稳定10 min后，从0.3 m高处用2.5 kg铁轮自由落体砸致大鼠两后肢上端骨折，动脉压(MAP)至40 mmHg时记录休克时间，断肢包扎止血，通过放血或输液维持该血压1.5 h。在此期间一侧股动脉插管以备放血和采血。复苏时回输3.5倍失血量的林格液，使血压恢复至失血前的3／4以上并保持。拔管缝合下肢创口，按手术常规无菌操作。复苏前死亡的大鼠不计入本组实验，另取大鼠补充。 　　1.3 动物分组 SD大鼠随机分为二组：失血性休克对照组予静注林格液；失血性休克UTI治疗组在休克末期静注乌UTI(广东天普生化医药股份有限公司)5万U/kg(溶于林格液)，每组各10只。动物在实验前禁食12 h，禁水8 h。 　　1.4 测定各组血浆一氧化氮合酶(NOS)及ET 　　 　　1.4.1 血浆NOS浓度变化 在休克前、休克末、复苏后2、4 h各时相点静脉采血2 ml，注入含10％依地酸二钠(EDTA)30 μl和抑肽酶40 μl的试管中混匀，3 000 r／min离心10 min，分离血浆置-20℃冷冻保存。每份离心液取50 μl按NOS检测试剂盒要求操作，在波长530 nm处测吸光度，按每分钟生成1 nmol NO为一个NOS酶活力单位计算。 　　1.4.2 血浆ET浓度变化 分组及处理同前。股静脉取血并应用放免试剂盒采用放射免疫法测定血浆ET浓度。 　　1.4.3 UTI对失血性休克大鼠存活率的影响 对照组和治疗组均给予林格液复苏，复苏时，治疗组给予5万U／kg的UTI。然后放鼠笼内记录，计算24 h存活率。 　　1.5 统计学处理 应用统计软件行t检验，24 h存活率比较行χ2检验。 　　2 结果 　　2.1 各组原生型NOS(cNOS)和诱生型NOS(iNOS)血浆浓度变化 在休克前、休克末、复苏后2、4 h各时相点数值见表1。对照组血浆cNOS呈逐渐下降趋势，而治疗组2 h及4 h时cNOS均明显上升(P＜0.05)。对照组血浆iNOS在休克末及复苏时均明显上升，治疗组在复苏后iNOS测定值明显下降(P＜0.01)。 　　　表1 各组cNOS和iNOS血浆浓度变化（略） 　　与对照组比较：1)P＜0.05，2)P＜0.01 　　2.2 各组ET测定值血浆浓度变化 对照组和治疗组相比较，在休克前、休克末、复苏后2 h、4 h各时相点数值见表2。对照组ET值在休克末及复苏后2 h、4 h较休克前显著增高(P＜0.05)。治疗组ET值在休克末也较休克前显著增高(P＜0.05)，但在复苏后2 h及4 h与对照组相比对ET的增高有明显抑制(P＜0.05)。 　　表2 各组ET测定值血