中药莪术中抗肿瘤成分莪术醇人工抗原合成及鉴定.docVIP

中药莪术中抗肿瘤成分莪术醇人工抗原合成及鉴定 　作者：杨新平，陈旭，李芳耀，阮方，林家逊，钟海雁 【摘要】 　　目的合成莪术醇全抗原并加以鉴定。方法先用莪术醇与琥珀酸酐为原料，以三氯甲烷为溶剂，4-二甲基氨基吡啶(DMAP)作催化剂，反应合成半抗原莪术醇琥珀酸单酯，然后，用1-乙基-3（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺法将莪术醇琥珀酸单酯偶联到牛血清白蛋白，合成了莪术醇的人工抗原，并用激光解析飞行质谱（MALDI-TOF-MS）进行了鉴定，利用质谱特征求得了偶联物中莪术醇与牛血清白蛋白的量，计算出结合比。结果成功地合成了莪术醇人工抗原，其结合比为19.6。结论用1-乙基-3（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺偶联法可合成莪术醇的完全抗原。 【关键词】 莪术； 莪术醇； 1-乙基-3（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺； 人工抗原； 莪术醇琥珀酸单酯 　　Abstract：ObjectiveTo synthesize and identify the artificial antigen of curcumol.MethodsFirstly，a hapten of curcumol, curcumol-hemisucinate(Cur.-HS) was synthesized using material of curcumol to react with succinic anhydride in chloroform and trace 4-dimethylaminopyridine(DMAP) as catalyst. Then the hapten was conjugated to bovine serum albumin(BSA) using 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide,(EDC) method and the characterization of the antigen was examined by MALDI-TOF-MS, and the conjugation ratio of curcumol to BSA was determined with MALDI-TOF-MS. ResultsThe artificial antigen was successfully synthesized and identified by MALDI-TOF-MS. The conjugation ratio of curcumol to BSA was 19.6. ConclusionThe artificial antigen of curcumol is successfully synthesized by EDC method. 　　Key words：Rhizoma Zedoariae； Curcumol； EDC； Antigen； Curcumol-hemisucinate 　　莪术是姜科植物蓬莪术Curcum a phaeocaulis Val.、广西莪术Curcuma kwangsiensis S.G.. Lee et C.F.Liang或温郁金Curcuma wenyujin Y. H. Chen et C.Ling的干燥根茎，后者习称“温莪术”。中医理论认为莪术辛、苦、温，归肝、脾经，具行气破血，消积止痛之功效［1］。莪术醇（Curcumol），又名姜黄环醇，是从莪术挥发油中提取出来的倍半萜类化合物，莪术醇是莪术油中有效成分之一，其药理作用主要集中在抗癌，抗菌和抗病毒等方面；莪术醇可作为莪术及莪术油质量评价依据之一［2］；目前检测莪术醇的方法主要有比色法、红外分光光度法、双波长薄层扫描法、气相色谱法［3］。比色法特异性不强，易受其他因素的影响；后几种仪器检测法都需要特定的仪器，对测定样品的前处理复杂，检测成本高，均不适合大批量样品的精确测定，故需要一种高效、快速、便捷的检测方法。 　　基于抗原抗体反应的酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA）具有快速、特异性强、灵敏度高、操作简便，本法适合大规模检测，已被广泛应用于农药、激素及其他化学污染物、残留物的检测；国内外有文献报道用该法研究药用植物中活性成分［4～10］，同时显示了该技术的许多优点和用途。莪术醇酶免疫吸附测定方法的建立在药物研发过程中药代动力学的研究及天然资源的筛选，药物生产过程中（包括种植、组织培养）的在线监测、药品流通和使用过程中批量样品的质量检测等方面有着广阔的应用前景。应用ELISA法必须有相应的抗体，莪术醇是小分子半抗原，本身不具有诱导产生抗体的能力，为此须将莪术醇小分子以半抗原的形式与相对分子量大的载体蛋白偶